化學(xué)發(fā)光法的基本原理精選(九篇)

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第1篇：化學(xué)發(fā)光法的基本原理范文

Abstract： As one of the detection of tumor marker for prostate cancer， prostate specific antigen （PSA） has been paid more and more attention at home. This article briefly introduces the biological characteristics and the basic principle and the method characteristics of test methods of PSA including enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）， radioimmunoassay （RIA）， chemical luminescence immunoassay （LICA） and Electrochemiluminescence immunoassay （ECLIA）， and the significance of PSA in the diagnosis of prostate cancer is also reviewed. PSA is the most useful immunocytochemical marker， whose specificity and sensitivity to confirm whether a certain tissue is from prostate are as high as 100%.

關(guān)鍵詞： 前列腺特異抗原；酶聯(lián)免疫分析法；放射免疫分析法；化學(xué)發(fā)光免疫分析法；電化學(xué)發(fā)光免疫分析法

Key words： prostate specific antigen；enzyme immunoassay；radioimmunoassay；chemiluminescence immunoassay；chemiluminescence immunoassay

中圖分類號(hào)：R446 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-4311（2013）26-0320-02

0 引言

前列腺特異抗原（Prostate Specific Antigen，PSA）是由前列腺腺泡和導(dǎo)管的上皮細(xì)胞分泌的一種單鏈糖蛋白，在功能上屬于類激肽釋放酶的一種絲氨酸蛋白酶，參與的液化過(guò)程，是臨床常規(guī)用于前列腺良性與惡性疾病診斷與鑒別診斷及前列腺癌患者術(shù)后隨訪的重要指標(biāo)。

PSA是主要由前列腺上皮細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白分解酶，正常情況下被分泌入前列腺液或中，以有活性的游離形式（f-PSA）存在，血清中的PSA主要以結(jié)合形式存在，通常以f-PSA與結(jié)合PSA的和即總PSA（t-PSA）代表血清總的PSA水平。血清PSA測(cè)定精確度高、穩(wěn)定、重復(fù)性好，而且是無(wú)創(chuàng)的，有助于前列腺癌早期診斷，監(jiān)測(cè)治療反應(yīng)及判斷預(yù)后。也可用于高危人群（50歲以上男性）前列腺癌的普查，是目前公認(rèn)的前列腺癌的腫瘤標(biāo)志物，與其他腫瘤標(biāo)志物相比，具有高度敏感性，多數(shù)文獻(xiàn)[1，2]報(bào)道敏感性達(dá)90.0%以上。

1980年Kuriyama等[3]報(bào)道了PSA的免疫測(cè)定法，并在前列腺癌（Prostate cancer，PCa）患者血清中測(cè)到了

PSA。現(xiàn)在PSA抗原的檢測(cè)常用的方法是酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、放射免疫測(cè)定法（RIA）、化學(xué)發(fā)光免疫分析法（LICA）及電化學(xué)發(fā)光免疫分析法（ECLIA）。

1 酶聯(lián)免疫吸附法

ELISA法是一種酶聯(lián)免疫技術(shù)。用于檢測(cè)包被于固相板孔中的待測(cè)抗原（或抗體）。即用酶標(biāo)記抗體，并將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使抗原抗體反應(yīng)在固相載體表面進(jìn)行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除，最后通過(guò)酶作用于底物后顯色來(lái)判斷結(jié)果。結(jié)合了放射性同位素的敏感性和免疫反應(yīng)的特異性，是一個(gè)可靠、經(jīng)濟(jì)和特異的測(cè)定方法。常用的ELISA法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測(cè)大分子抗原，后者用于測(cè)定特異抗體。測(cè)定抗原的，主要有以下方法。

1.1 雙抗體夾心法

本法首先是用特異性抗體包被于固相載體，經(jīng)洗滌后加入含有抗原之待測(cè)樣品，如待檢樣品中有相應(yīng)抗原存在，即可與包被于固相載體上的特異性抗體結(jié)合，經(jīng)保溫孵育洗滌后，即可加入酶標(biāo)記特異性抗體，再經(jīng)孵育洗滌后，加底物顯色進(jìn)行測(cè)定，底物降解的量即為欲測(cè)抗原

的量[4]。

這種方法欲測(cè)的抗原必須有兩個(gè)可以與抗體結(jié)合的部位，因?yàn)槠湟欢艘挥诠滔噍d體上的抗體作用，而另一端則要與酶標(biāo)記特異性抗體作用。因此，不能用于分子量小于5000的半抗原之類的抗原測(cè)定。此法在霍亂腸毒素、HBsAg及HbS的測(cè)定中有應(yīng)用。陳松等[4]用抗體夾心ELISA法直接檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植物體內(nèi)Bt毒蛋白含量，認(rèn)為其簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確。

1.2 改良雙抗體夾心法

本法是雙抗體夾心法的一種改良形式，也是用于測(cè)定抗原的。與改良前的雙抗夾心不同之處在于本法也是首先將特異性抗體a包被于固相載體，抗原與特異性抗體a結(jié)合后再與特異性抗體b結(jié)合，而這次加入的抗體b于第一次包被于固相載體上的特異性抗體a對(duì)被測(cè)抗原來(lái)說(shuō)都是特異性的，但不是用同種動(dòng)物免疫制備的，否則可出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。形成抗體a-待測(cè)抗原-抗體b復(fù)合物，此復(fù)合物再與酶標(biāo)記抗b抗體結(jié)合。這種方法與雙抗體夾心法不同之處是多加了一層抗體。因此，放大的倍數(shù)更高，故比雙抗體夾心法更加靈敏。同時(shí)避免標(biāo)記特異性抗體，而另一優(yōu)點(diǎn)是只要標(biāo)記一種抗體，即可達(dá)到多種應(yīng)用。

1.3 間接法

用于測(cè)定抗體。將已知抗原連接在固相載體上，待測(cè)抗體與抗原結(jié)合后再與酶標(biāo)二抗結(jié)合，形成抗原-待測(cè)抗體-酶標(biāo)二抗的復(fù)合物，復(fù)合物的形成量與待測(cè)抗體量成正比[5]。

2 放射免疫測(cè)定法（RIA）[6]

它包括以標(biāo)記抗原（Antigen，Ag）為特點(diǎn)的放射免疫分析（RIA）和以標(biāo)記抗體（Antibody，Ab）為特點(diǎn)的免疫放射分析（IRMA）。前者以液相競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合法居多，既測(cè)大分子抗原又測(cè)小分子抗原；后者以固相法測(cè)大分子抗原為主。

放射免疫法（RIA）優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)、靈敏度高、精確、簡(jiǎn)便易行。

3 化學(xué)發(fā)光法（CLA）[7]

吖啶酯類化合物具有較弱的共價(jià)鍵，分解時(shí)可釋放化學(xué)能產(chǎn)生激發(fā)態(tài)的中間物，根據(jù)后者衰變成基態(tài)時(shí)可發(fā)射出光的原理，將包被有單克隆抗體的順磁性微粒和PSA結(jié)合，再與吖啶酯標(biāo)記的PSA抗體結(jié)合形成雙抗體夾心免疫復(fù)合物，加上lite試劑（堿性雙氧水溶液）以增加發(fā)光強(qiáng)度，然后在發(fā)光儀（如ACS180）測(cè)定發(fā)光強(qiáng)度。

此法線性范圍寬達(dá)200μg/L，一般15分鐘出結(jié)果，LLD為0.2μg/L，批內(nèi)CV：2.2～4.3%，批間CV：5.0～7.0%，正常參考范圍0～4.0μg/L，但需有專門設(shè)備和高純度試劑。

光激發(fā)化學(xué)發(fā)光免疫（LICA）分析技術(shù)是一種基于光激發(fā)、能量轉(zhuǎn)移，并結(jié)合免疫分析的均相免疫測(cè)定方法，已廣泛應(yīng)用于多種物質(zhì)的定量測(cè)定[7]。劉志永[8]等曾報(bào)道用PSA多克隆抗體包被受體微粒，PSA單克隆抗體標(biāo)記生物素，兩者與鏈霉親和素包被的供體微粒共同組成檢測(cè)試劑檢測(cè)PSA，優(yōu)化測(cè)定條件并對(duì)方法進(jìn)行驗(yàn)證。分別采用本方法與Roche公司電化學(xué)發(fā)光免疫分析法對(duì)82份臨床標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，并進(jìn)行比較分析。

結(jié)果本方法的分析靈敏度為0.31ng/ml；批內(nèi)變異系數(shù)為4.66%～6.75%，批間變異系數(shù)為5.68%～8.42%；回收率為95.1%～105.2%。兩種方法具有較好的相關(guān)性，其R2為0.9815。結(jié)論建立的均相化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定方法能夠用于血清PSA的定量測(cè)定，且其性能指標(biāo)符合臨床要求。

LOCI技術(shù)最初由Ullman等[9]報(bào)道，后由PerkinElmer公司生產(chǎn)相關(guān)試劑（AlphaScreen），并應(yīng)用于藥物濃度測(cè)定等領(lǐng)域。LOCI技術(shù)是利用納米微球、單線態(tài)氧分子的能力轉(zhuǎn)移、發(fā)光分析和抗原-抗體（受體-配體）結(jié)合等原理建立的一種全新的免疫分析系統(tǒng)。與現(xiàn)有的發(fā)光免疫分析系統(tǒng)相比，均相免疫分析方法使用的免分離（洗滌）過(guò)程提高了免疫分析的精密度，并縮短了測(cè)定時(shí)間[10]。國(guó)內(nèi)學(xué)者已通過(guò)該技術(shù)建立了多種有效的物質(zhì)測(cè)定方法[11-13]。

4 電化學(xué)發(fā)光免疫分析法（ECLIA）

電化學(xué)發(fā)光免疫分析是集電化學(xué)發(fā)光技術(shù)、磁微球技術(shù)和生物素-抗生物素技術(shù)為一體的新型標(biāo)記免疫分析技術(shù)。與其他幾種標(biāo)記免疫分析技術(shù)相比它有如下優(yōu)點(diǎn)：

①可用電化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)的地方，應(yīng)用范圍廣，凡能用其他免疫分析法檢測(cè)的項(xiàng)目，都可以使用它；

②節(jié)約試劑；

③反應(yīng)可控性、時(shí)空可控性好；

④儀器操作簡(jiǎn)單，自動(dòng)化程度高；

⑤安全無(wú)放射性危害；

⑥檢測(cè)速度快，檢測(cè)僅需10min左右；

⑦檢測(cè)的靈敏度高、線性范圍寬[14，15]。

總之，前列腺疾病患者血清前列腺特異性抗原PSA的檢測(cè)方法多種多樣，各有其優(yōu)缺點(diǎn)，我們可針對(duì)性的選擇不同方法對(duì)PSA進(jìn)行檢測(cè)。

在前列腺癌診斷明確的情況下，用以判斷患者對(duì)治療的敏感性、病情好轉(zhuǎn)情況、復(fù)發(fā)等，血清PSA是最敏感的腫瘤標(biāo)志物，但血清PSA不能作為前列腺癌的單一診斷指標(biāo)。

參考文獻(xiàn)：

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第2篇：化學(xué)發(fā)光法的基本原理范文

1．1課程設(shè)計(jì)理念

“儀器分析實(shí)驗(yàn)”是應(yīng)用化學(xué)專業(yè)必修的基礎(chǔ)課程之一，它是分析化學(xué)不可分割的重要組成部分。通過(guò)本課程的學(xué)習(xí)，學(xué)生比較系統(tǒng)地掌握儀器分析的基本理論和操作，能根據(jù)不同儀器的性能、不同分析對(duì)象選擇合適的分析方法。能夠運(yùn)用分析技術(shù)解決生產(chǎn)和科研的實(shí)際問(wèn)題，并初步具備從事儀器分析方面研究工作的方法與能力。為此，我們的設(shè)計(jì)理念是“夯實(shí)基礎(chǔ)，綜合訓(xùn)練，創(chuàng)新提高，實(shí)踐應(yīng)用”?！昂粚?shí)基礎(chǔ)”要求所有學(xué)生都要完成基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)，加深理解儀器分析的基本原理，掌握大型儀器的使用方法;“綜合訓(xùn)練”是指每個(gè)學(xué)生必須完成部分綜合性實(shí)驗(yàn)，能夠綜合運(yùn)用所學(xué)的知識(shí)和各種儀器分析測(cè)定實(shí)際樣品，掌握常用的樣品前處理方法;“創(chuàng)新提高”是指學(xué)生自主選擇1－2個(gè)創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)，課下完成，針對(duì)生產(chǎn)生活實(shí)際中的某個(gè)問(wèn)題，查閱文獻(xiàn)，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，得到產(chǎn)品，進(jìn)行表征或測(cè)定，并評(píng)價(jià)其使用效果，無(wú)論成功與否，都要給出合理的解釋。通過(guò)這樣的訓(xùn)練，可以培養(yǎng)學(xué)生的問(wèn)題意識(shí)和創(chuàng)新能力，為下一步畢業(yè)論文和今后的研究生學(xué)習(xí)奠定基礎(chǔ)。“實(shí)踐應(yīng)用”是指學(xué)生通過(guò)見習(xí)實(shí)習(xí)，加深理解課堂上所學(xué)的知識(shí);更重要的是利用學(xué)到的基本理論和分析方法去解決生產(chǎn)生活中遇到的實(shí)際問(wèn)題，增強(qiáng)綜合應(yīng)用能力。

1．2課時(shí)安排

在2011版應(yīng)用化學(xué)專業(yè)培養(yǎng)方案中，儀器分析實(shí)驗(yàn)在第5學(xué)期與儀器分析課同時(shí)開設(shè)，安排在無(wú)機(jī)化學(xué)及實(shí)驗(yàn)、有機(jī)化學(xué)及實(shí)驗(yàn)、分析化學(xué)及實(shí)驗(yàn)等基礎(chǔ)課程之后，48學(xué)時(shí)，開設(shè)12個(gè)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，教學(xué)大綱提供了26個(gè)項(xiàng)目，其他實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目作為開放實(shí)驗(yàn)，供有興趣的學(xué)生課下完成。

1．3課程體系

近年來(lái)，我們緊緊圍繞應(yīng)用型人才和創(chuàng)新型人才培養(yǎng)目標(biāo)，按照儀器分析實(shí)驗(yàn)的要求，課程組以教育部精品課程建設(shè)宗旨為指導(dǎo)，以學(xué)生實(shí)驗(yàn)?zāi)芰蛣?chuàng)新能力培養(yǎng)為切入點(diǎn)，對(duì)儀器分析實(shí)驗(yàn)課程目標(biāo)和教學(xué)內(nèi)容進(jìn)行了一系列改革，形成了相對(duì)獨(dú)立的由基礎(chǔ)性、綜合性與創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)以及實(shí)踐實(shí)訓(xùn)構(gòu)成的課程新體系，體現(xiàn)了從易到難、從簡(jiǎn)單到綜合、從基本技能訓(xùn)練到創(chuàng)新能力養(yǎng)成的認(rèn)知發(fā)展規(guī)律。

(1)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)

共有8個(gè)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)，其中6個(gè)為必做實(shí)驗(yàn)。該類實(shí)驗(yàn)針對(duì)基本的分析方法，選擇常用的儀器，開設(shè)較為簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)，目的是讓學(xué)生學(xué)習(xí)和掌握大型儀器的使用方法和基本操作，了解儀器的基本結(jié)構(gòu)，學(xué)會(huì)記錄和分析處理數(shù)據(jù)，為養(yǎng)成良好的科學(xué)素養(yǎng)打下基礎(chǔ)。通過(guò)第一層次的實(shí)驗(yàn)，強(qiáng)化了學(xué)生的動(dòng)手能力和操作技能，并為后續(xù)實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。

(2)綜合性實(shí)驗(yàn)

2個(gè)綜合性實(shí)驗(yàn)為學(xué)生必做實(shí)驗(yàn)，其余10個(gè)為選做實(shí)驗(yàn)。綜合性實(shí)驗(yàn)包括樣品前處理和分析測(cè)定兩部分。目的是讓學(xué)生進(jìn)一步熟悉原有儀器的使用，學(xué)習(xí)新型儀器的操作，如氣質(zhì)聯(lián)用儀、液質(zhì)聯(lián)用儀、X－射線衍射儀等，掌握常用的樣品前處理方法，培養(yǎng)學(xué)生綜合運(yùn)用知識(shí)解決問(wèn)題的能力。

(3)創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)

該類實(shí)驗(yàn)難度較大，教師精選生產(chǎn)生活實(shí)際中的問(wèn)題，只給出實(shí)驗(yàn)要求。學(xué)生必須進(jìn)行社會(huì)調(diào)查、查閱文獻(xiàn)、設(shè)計(jì)方案、獨(dú)立完成實(shí)驗(yàn)、分析數(shù)據(jù)、得出結(jié)論。這類實(shí)驗(yàn)以開放性實(shí)驗(yàn)開出，與大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練項(xiàng)目、教師科研課題相結(jié)合，培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新能力和科研意識(shí)。

(4)實(shí)踐實(shí)訓(xùn)

為了實(shí)現(xiàn)應(yīng)用型人才的培養(yǎng)目標(biāo)，課程組非常重視學(xué)生的實(shí)踐實(shí)訓(xùn)工作，積極開展第二課堂。結(jié)合環(huán)保主題開展臨沂市水質(zhì)調(diào)研、土壤中重金屬污染情況的調(diào)查，對(duì)水質(zhì)的各種指標(biāo)和土壤中重金屬離子的含量進(jìn)行測(cè)定。學(xué)生查閱文獻(xiàn)設(shè)計(jì)方案，不同小組可以選用不同的儀器進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)一步熟悉氣相色譜儀、液相色譜儀、ICP－OES光譜儀、原子吸收光度計(jì)和原子熒光光度計(jì)的使用，掌握樣品的前處理方法。比較不同小組的測(cè)定結(jié)果，并與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照，確定水或土壤是否被污染。2011年，我們組織的臨沂大學(xué)沂河水質(zhì)調(diào)研團(tuán)獲山東省暑期“三下鄉(xiāng)”社會(huì)實(shí)踐優(yōu)秀服務(wù)隊(duì)。充分利用現(xiàn)有的實(shí)習(xí)學(xué)生進(jìn)行參觀學(xué)習(xí)或?qū)嵙?xí)，在實(shí)踐中開闊視野，學(xué)習(xí)了解先進(jìn)的分析儀器。學(xué)生在學(xué)習(xí)儀器分析之前，接觸到的分析儀器都是玻璃儀器，復(fù)雜一點(diǎn)的就是紫外－可見分光光度計(jì)，所以對(duì)于大型儀器非常陌生。開始新課前，我們組織學(xué)生分組到儀器分析實(shí)驗(yàn)室和分析測(cè)試中心，見識(shí)將要用到的大型儀器，對(duì)于學(xué)校沒(méi)有的較先進(jìn)的儀器，就帶學(xué)生去實(shí)習(xí)單位參觀，了解分析化學(xué)的應(yīng)用領(lǐng)域，大型儀器在現(xiàn)代分析中的重要地位，明確儀器分析要解決的問(wèn)題，讓學(xué)生帶著實(shí)際問(wèn)題學(xué)習(xí)，增強(qiáng)學(xué)習(xí)的目的性和針對(duì)性，提高學(xué)習(xí)效果。教學(xué)結(jié)束時(shí)，部分有興趣的學(xué)生，可以再去實(shí)習(xí)基地見習(xí)或?qū)嵙?xí)1～2周，用學(xué)到的知識(shí)去解決問(wèn)題，對(duì)實(shí)際樣品進(jìn)行處理和測(cè)定，深刻體會(huì)學(xué)有所用、學(xué)有所成的道理。大四下學(xué)期，所有的學(xué)生都要去基地實(shí)習(xí)2－3個(gè)月，實(shí)習(xí)期間，學(xué)生進(jìn)行系統(tǒng)的訓(xùn)練，從設(shè)計(jì)方案，到優(yōu)化條件，最終建立一種靈敏度較高、選擇性較好的分析方法，或者對(duì)已有的方法進(jìn)行改進(jìn)，在校內(nèi)教師和基地老師的指導(dǎo)下完成畢業(yè)論文。

2儀器分析實(shí)驗(yàn)課程內(nèi)容

為了適應(yīng)不斷發(fā)展變化的社會(huì)需求和人才培養(yǎng)需要，我們積極吸收行業(yè)企業(yè)參與課程內(nèi)容和課程體系改革，臨沂市環(huán)境監(jiān)測(cè)站、臨沂市出入境檢驗(yàn)檢疫局、臨沂市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所、臨沂市藥品檢驗(yàn)所等監(jiān)測(cè)部門、山東金正大生態(tài)工程股份有限公司、魯南制藥集團(tuán)股份有限公司、天津藥明康德新藥開發(fā)有限公司、山東濰坊潤(rùn)豐化工有限公司等企業(yè)對(duì)儀器分析實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的設(shè)置提出了修改建議。我們主要從以下幾方面對(duì)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容進(jìn)行了修訂。

2．1從生產(chǎn)生活實(shí)際出發(fā)選擇實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

儀器分析實(shí)驗(yàn)教學(xué)的內(nèi)容要貼近生活、生產(chǎn)實(shí)際，強(qiáng)調(diào)知識(shí)的應(yīng)用和內(nèi)容的開放性，這樣才能激發(fā)學(xué)生的好奇心，從而引起對(duì)實(shí)驗(yàn)的興趣。討論問(wèn)題不能一味地從理論知識(shí)開始，應(yīng)注重從與知識(shí)相關(guān)的應(yīng)用和技術(shù)以及社會(huì)的角度進(jìn)行思考，從項(xiàng)目(主題)及應(yīng)用性的問(wèn)題出發(fā)，根據(jù)需要合理選擇實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。例如:在原子吸收分光光度法中就可以選擇頭發(fā)中微量元素含量的測(cè)定，雙波長(zhǎng)紫外分光光度法測(cè)定復(fù)方磺胺甲噁唑片中磺胺甲噁唑含量，循環(huán)伏安法可以選擇各種飲料中葡萄糖含量的測(cè)定，既保證了實(shí)用性，又增加了前處理的內(nèi)容。對(duì)于社會(huì)上出現(xiàn)的一些熱點(diǎn)問(wèn)題將其有選擇性地融入儀器分析實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，如假藥的檢測(cè)、蘇丹紅及三聚氰胺的分析等此類探索研究性實(shí)驗(yàn)，作為開放性實(shí)驗(yàn)，對(duì)一些有濃厚興趣且基礎(chǔ)較好的學(xué)生單獨(dú)開放。學(xué)生通過(guò)實(shí)驗(yàn)可以體會(huì)到儀器分析實(shí)驗(yàn)在社會(huì)生產(chǎn)和生活中的巨大作用，以及給社會(huì)生活帶來(lái)的便利，并且認(rèn)識(shí)到，如果不合理地利用科學(xué)技術(shù)，它會(huì)給人類帶來(lái)危害，甚至是災(zāi)難，讓學(xué)生關(guān)注與科學(xué)有關(guān)的社會(huì)問(wèn)題，增強(qiáng)社會(huì)責(zé)任感。

2．2刪除陳舊的內(nèi)容，增加新技術(shù)新方法

傳統(tǒng)的儀器分析實(shí)驗(yàn)內(nèi)容多是一些驗(yàn)證性和低層次的常規(guī)實(shí)驗(yàn)，與現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)方法技術(shù)和現(xiàn)實(shí)應(yīng)用等相差較遠(yuǎn)，無(wú)法調(diào)動(dòng)學(xué)生學(xué)習(xí)實(shí)驗(yàn)課的興趣和積極性。在實(shí)驗(yàn)課的教學(xué)過(guò)程中，必須結(jié)合科學(xué)發(fā)展前沿介紹本學(xué)科的新理論、新方法，以及本學(xué)科與其他相關(guān)學(xué)科的關(guān)系。以基礎(chǔ)理論為主線，以典型的實(shí)驗(yàn)為重點(diǎn)，以實(shí)際操作為核心，在集中講授研究成熟、應(yīng)用性廣泛的儀器方法的同時(shí)，要讓學(xué)生通過(guò)查閱文獻(xiàn)，掌握現(xiàn)代儀器理論的最新動(dòng)態(tài)，了解本學(xué)科涌現(xiàn)的新知識(shí)、新技術(shù)、新方法，使學(xué)生受到現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的熏陶。基于這一想法，我們?cè)黾恿擞嘘P(guān)新儀器、新方法、新技術(shù)的實(shí)驗(yàn)，如“吹掃捕集－氣相色譜/質(zhì)譜法測(cè)定水中苯系物的組成”、“松果菊中組分的LC/MS分析”、“流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)DNA”、“基于納米金比色分析法測(cè)定中藥材中的汞離子”等。

2．3提高綜合性實(shí)驗(yàn)和創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)的比例

不少學(xué)生希望老師把更多的思維空間留給他們，讓他們有獨(dú)立思考的機(jī)會(huì)。為此我們嘗試把學(xué)生的一些基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)成研究型實(shí)驗(yàn)，把科學(xué)前沿領(lǐng)域的知識(shí)引入學(xué)生實(shí)驗(yàn)中來(lái)，增加創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)，旨在調(diào)動(dòng)學(xué)生的積極性，培養(yǎng)學(xué)生的綜合能力。例如“HPLC法測(cè)定中藥材提取物和克林霉素磷酸酯注射液中抑菌劑含量”、“葉綠素的提取分離及葉綠素金屬絡(luò)合物的合成與鑒定”、“固相萃?。璈PLC檢測(cè)土壤中的三嗪類除草劑”等。通過(guò)實(shí)驗(yàn)，學(xué)生很好的掌握了樣本的提取與預(yù)處理，以及氣相色譜、液相色譜、紫外－可見分光光度計(jì)、原子吸收分光光度計(jì)等儀器的使用和注意事項(xiàng)，初步具備了實(shí)驗(yàn)方案制定的能力，并對(duì)現(xiàn)代儀器的原理、結(jié)構(gòu)和操作有了更深一步的了解。

2．4及時(shí)將教師的科研成果轉(zhuǎn)化為實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

課程組教師堅(jiān)持以教學(xué)為中心，教學(xué)與科研相互促進(jìn)，積極開展科研工作，形成了幾個(gè)較為穩(wěn)定的研究方向:生命化學(xué)分析、納米改性與傳感、環(huán)境分析、天然產(chǎn)物分離與分析。課程組充分利用科研優(yōu)勢(shì)推動(dòng)教學(xué)改革和實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的更新，部分教師的研究成果已經(jīng)成為儀器分析實(shí)驗(yàn)的重要組成部分。例如，“流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)DNA”來(lái)源于生命化學(xué)分析研究方向，“毛細(xì)管電泳法測(cè)定阿司匹林中水楊酸的含量”、“松果菊中組分的LC/MS分析”等實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目來(lái)源于天然產(chǎn)物分離與分析方向，“基于納米金比色分析法測(cè)定水中的汞離子”、“稀土摻雜TiO2光催化劑制備及光催化活性的研究”來(lái)源于納米改性與傳感方向，“土壤中砷的形態(tài)分析”，“金屬離子印跡聚合物的制備及水中鎘離子的測(cè)定”等實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目來(lái)源于環(huán)境分析化學(xué)方向。這些實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的實(shí)施，既完善了實(shí)驗(yàn)教學(xué)體系，又充實(shí)了實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，有助于學(xué)生了解科學(xué)研究的過(guò)程，激發(fā)參與教師科研課題的熱情。

3結(jié)語(yǔ)

第3篇：化學(xué)發(fā)光法的基本原理范文

【關(guān)鍵詞】 紫癜，過(guò)敏性/預(yù)防與控制; 過(guò)敏原/致病力; 紫癜，過(guò)敏性/尿; 過(guò)敏原檢測(cè); 兒童

過(guò)敏性紫癜(HenochSchonlein purpura，HSP)是以小血管炎為主要病變的系統(tǒng)性血管炎。其臨床特點(diǎn)是非血小板減少性紫癜、關(guān)節(jié)腫痛、腹痛、便血、血尿和蛋白尿。HSP為兒科常見病、多發(fā)病，多發(fā)生于2～8歲的兒童，好發(fā)于冬春二季。盡管部分患兒病情可以自然恢復(fù)，但約有1/3的患兒頻繁復(fù)發(fā)，加重腎臟的損害。而HSP的病因及發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，誘發(fā)因素復(fù)雜多樣，近年來(lái)研究認(rèn)為過(guò)敏因素在HSP的發(fā)病中起著一定的作用，盡可能尋找并避免過(guò)敏原，對(duì)防止HSP有重要意義[13]。

1 兒童HSP常見過(guò)敏原

能誘發(fā)HSP的過(guò)敏原有很多種，主要通過(guò)吸入、食入等方式使機(jī)體致敏。

1.1 吸入性過(guò)敏原 主要分為室內(nèi)過(guò)敏原和室外過(guò)敏原。(1)室內(nèi)過(guò)敏原：①室內(nèi)塵土類過(guò)敏原，主要包括人類的上皮脫屑、動(dòng)物皮毛及脫屑、塵螨和分泌物、真菌及其代謝產(chǎn)物、棉花纖維、植物纖維等;②屋塵螨:以人體脫落的皮屑為食物，主要寄生于臥室的床鋪、地毯、沙發(fā)等處，尤其在沿海潮濕地區(qū)易孳生;③真菌:主要致敏的菌種包括交鏈胞霉屬、青霉、毛霉、曲霉、黑根霉和鐮刀霉等，其中交鏈胞霉及其分支胞屬是空氣中傳播量最大，致敏性最強(qiáng)的真菌，在熱帶、潮濕多雨和海拔較低的地區(qū)，周圍環(huán)境及居室內(nèi)容易孳生;④蟑螂:被認(rèn)為是引起過(guò)敏性疾病的主要過(guò)敏原;⑤動(dòng)物皮毛和分泌物:家中篆養(yǎng)的貓、狗、兔、鳥等寵物的分泌物、皮屑和脫毛等均可成為過(guò)敏原。(2)室外過(guò)敏原:花粉，主要指以風(fēng)為傳播媒介的氣體花粉。①春季花粉，國(guó)內(nèi)南方的春季花粉飄散季節(jié)在2～5月份，花粉種類以楓楊屬、桉屬、松屬及柏科為主;北方的春季花粉飄散季節(jié)在4～6月份，花粉種類以楊屬、松屬、榆屬、柳屬為主;②夏季花粉，飄散季節(jié)在6～8月份，花粉種類主要有玉米、高粱、小麥、莎草、藜科等植物花粉;③秋季花粉，飄散季節(jié)以8～10月份為主，花粉種類主要包括雜草花粉和禾本科植物花粉，如豚草屬、嵩屬、藜科等。國(guó)內(nèi)南方的秋季花粉以禾本科植物花粉為主，而北方以嵩屬花粉為主。豚草花粉在北美國(guó)家是重要的致敏花粉。

1.2 食物性過(guò)敏原 (1)過(guò)敏性食物：常見的過(guò)敏性食物有類：雞蛋、牛奶、魚、貝殼類海產(chǎn)品、堅(jiān)果(胡桃、腰果)、花生、黃豆、小麥，可引發(fā)90%以上的過(guò)敏反應(yīng);還有牛肉、豬肉、羊肉、雞肉、玉米、芝麻、草莓和菠蘿等不常見的過(guò)敏食物。(2)食品添加劑過(guò)敏原：食品添加劑中的香料、色素、抗氧化劑、防腐劑等均可導(dǎo)致過(guò)敏反應(yīng)，其中以色素、香料引起的過(guò)敏反應(yīng)最為常見。

2 過(guò)敏反應(yīng)類型

2.1 Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng) 臨床上大多數(shù)的過(guò)敏反應(yīng)是Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)，又稱速發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)。介導(dǎo)Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)的過(guò)敏原分布較廣，目前臨床上能夠檢測(cè)的過(guò)敏原有數(shù)十種，包括吸入性過(guò)敏原和食物過(guò)敏原。Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)發(fā)作迅速，多為接觸過(guò)敏原數(shù)分鐘到1 h內(nèi)發(fā)生，由肥大細(xì)胞和IgE介導(dǎo)。變應(yīng)原進(jìn)入體內(nèi)，刺激單核吞噬系統(tǒng)，引起漿細(xì)胞反應(yīng)，產(chǎn)生特異性IgE，與肥大細(xì)胞或嗜堿性粒細(xì)胞表面IgE受體橋聯(lián)，使這些細(xì)胞處于致敏狀態(tài)。當(dāng)致敏的肥大細(xì)胞再次暴露于致敏物質(zhì)，則引起肥大細(xì)胞脫顆粒，釋放介質(zhì)，引起一系列過(guò)敏癥狀。

2.2 Ⅲ型過(guò)敏反應(yīng) 又稱延遲型過(guò)敏反應(yīng)，多為接觸過(guò)敏原數(shù)小時(shí)到數(shù)天后發(fā)生，由IgG介導(dǎo)。研究發(fā)現(xiàn)，食物可成為過(guò)敏原誘發(fā)IgG介導(dǎo)的延遲型過(guò)敏反應(yīng)，而且常為喜食的食物[46]。其致病機(jī)制是免疫系統(tǒng)把進(jìn)入人體內(nèi)的某些食物當(dāng)作有害物質(zhì)，針對(duì)其產(chǎn)生過(guò)度性免疫反應(yīng)，產(chǎn)生食物特異性IgG抗體，IgG抗體與食物顆粒形成免疫復(fù)合物(Ⅲ型變態(tài)反應(yīng))，可能引起所有組織(包括血管)發(fā)生炎癥反應(yīng)，并表現(xiàn)為全身各系統(tǒng)的癥狀。目前也將這種由IgG介導(dǎo)的食物過(guò)敏反應(yīng)稱為食物不耐受。

3 過(guò)敏原檢測(cè)方法

3.1 體內(nèi)方法 包括皮膚試驗(yàn)、激發(fā)試驗(yàn)、過(guò)敏原激發(fā)試驗(yàn)等。激發(fā)試驗(yàn)和過(guò)敏原激發(fā)試驗(yàn)在HSP患兒中應(yīng)用較少，主要應(yīng)用于哮喘患兒。

3.1.1 皮膚試驗(yàn)的原理 皮膚試驗(yàn)是最常用的體內(nèi)方法，也是診斷IgE介導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)性疾病的主要檢測(cè)方法。其基本原理是當(dāng)某種過(guò)敏原進(jìn)入皮膚時(shí)，對(duì)某些物質(zhì)有速發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)的患兒，立即特異性地引起皮膚內(nèi)的肥大細(xì)胞脫顆粒，釋放組胺等活性物質(zhì)，導(dǎo)致局部毛細(xì)血管擴(kuò)張(皮膚紅斑)，毛細(xì)血管通透性增強(qiáng)(皮膚水腫、風(fēng)團(tuán))。依據(jù)皮膚反應(yīng)的出現(xiàn)和程度來(lái)可確定過(guò)敏原。

3.1.2 皮膚試驗(yàn)的方法 包括皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)、皮內(nèi)試驗(yàn)及皮膚斑貼實(shí)驗(yàn)，其中皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)最常用。(1)皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)(skin prick test，SPT)：SPT是將少量高度純化的過(guò)敏原液體和對(duì)照液體(組胺)分別滴于患兒前臂，再用點(diǎn)刺針垂直輕輕刺入皮膚表層，維持1秒鐘后拔出。如患兒對(duì)該過(guò)敏原過(guò)敏，則會(huì)于15 min內(nèi)在點(diǎn)刺部位出現(xiàn)類似蚊蟲叮咬的紅腫塊，出現(xiàn)癢的反應(yīng)，或顏色上有改變。該方法采用組胺作陽(yáng)性對(duì)照，計(jì)算相對(duì)的反應(yīng)強(qiáng)度，15～20 min觀察結(jié)果。陽(yáng)性結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)以過(guò)敏原及陽(yáng)性對(duì)照液(組胺)所致風(fēng)團(tuán)面積比而定其反應(yīng)級(jí)別。SPT具有安全、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、設(shè)備簡(jiǎn)備、檢測(cè)時(shí)間短，一次試驗(yàn)可測(cè)定多種過(guò)敏原等優(yōu)點(diǎn)，與臨床過(guò)敏性疾病的相關(guān)性好，但特異性不夠。(2)皮內(nèi)試驗(yàn)：只在皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)陰性而無(wú)更高濃度的過(guò)敏原提取物可供使用時(shí)才進(jìn)行。操作方法：用1 mL注射器在皮內(nèi)注入0.02～0.04 mL過(guò)敏原皮試液，使之形成一個(gè)直徑3～4 mm大小的皮丘。15～20 min觀察結(jié)果，陽(yáng)性反應(yīng)表現(xiàn)為注射處皮膚風(fēng)團(tuán)和紅暈。(3)皮膚斑貼實(shí)驗(yàn)：主要用于接觸性皮炎患兒的過(guò)敏原診斷，成人應(yīng)用較多，兒童較少使用。使用方法：將包被過(guò)敏原的貼片貼于健康、無(wú)毛發(fā)的皮膚部位，推薦采用部位為背部上方、脊柱左側(cè)和(或)右側(cè)。

3.1.3 皮膚試驗(yàn)需注意的問(wèn)題 皮膚試驗(yàn)受多種因素影響，不可避免的存在假陽(yáng)性和假陰性反應(yīng)，皮膚試驗(yàn)前應(yīng)詳細(xì)詢問(wèn)用藥史及過(guò)敏史，以確保試驗(yàn)的安全及檢查結(jié)果的可靠。通常在皮膚試驗(yàn)前需?？菇M胺藥3 d以上，少數(shù)抗組胺藥(如阿司米唑)需停用3～4周;應(yīng)用酮替芬者，需停藥2～3 d;長(zhǎng)期、高劑量糖皮質(zhì)激素的使用對(duì)結(jié)果的判定有影響，應(yīng)在病情允許情況下減量。如為高度敏感狀態(tài)者及已經(jīng)明確嚴(yán)重的食物過(guò)敏者禁做皮膚試驗(yàn)，HSP患兒在疾病的急性發(fā)作期不適合應(yīng)用皮膚試驗(yàn)檢測(cè)過(guò)敏原，但是對(duì)于頻繁復(fù)發(fā)的HSP患兒，在疾病的間歇期可以應(yīng)用皮膚試驗(yàn)方法檢測(cè)過(guò)敏原。

3.2 體外方法 主要是檢測(cè)患兒血清過(guò)敏原特異性IgE(sIgE)、食物過(guò)敏原特異性IgG。其在HSP患兒中應(yīng)用最多，與皮膚實(shí)驗(yàn)比較，體外方法絕對(duì)安全、不受皮膚疾病、藥物影響，并且為定量。

3.2.1 IgE的檢測(cè) 包括血清總IgE和sIgE檢測(cè)。目前測(cè)定總IgE、sIgE的方法主要包括雙抗體夾心法、放免吸附試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫試驗(yàn)、熒光酶聯(lián)免疫分析、線性分析、生物芯片、免疫捕獲分析、化學(xué)發(fā)光法等。影響總IgE水平的因素很多，如患兒年齡、性別、種族、寄生蟲感染等，因此總IgE水平高不一定是過(guò)敏性疾病患兒，而過(guò)敏者總IgE水平不一定高。sIgE有很好的敏感性和特異性，CAP過(guò)敏原檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定方法[7]在臨床上應(yīng)用較多，CAP檢測(cè)系統(tǒng)為Pharmacia Diagnostics AB產(chǎn)品，包括：儀器(UniCAP 100)、軟件(UniCAP 100 RM5.00)。5 種過(guò)敏原：塵螨(d1/d2)、蒿屬花粉(w5/w6)、蓉草花粉(w22)、貓毛(e1)、鏈格孢霉(m6)及其他配套的CAP診斷試劑。其基本原理為熒光酶聯(lián)免疫分析，過(guò)敏原包被在一種稱為CAP的固相載體中，該系統(tǒng)定量檢測(cè)的sIgE濃度水平分為7個(gè)級(jí)別。

3.2.2 食物過(guò)敏原特異性IgG的測(cè)定 檢測(cè)食物過(guò)敏反應(yīng)的方法較簡(jiǎn)單，目前多采用酶聯(lián)免疫法半定量檢測(cè)血清中食物過(guò)敏原特異性IgG?？梢詸z測(cè)包括魚、蛋清/蛋黃、牛奶、牛肉、蝦、大豆、花生7項(xiàng)食物特異性IgG;14項(xiàng)組合可以檢測(cè)牛肉、雞肉、鱈魚、玉米、蟹、蛋清/蛋黃、蘑菇、牛奶、豬肉、大米、蝦、大豆、西紅柿、小麥等14項(xiàng)食物特異性IgG;90項(xiàng)組合可以檢測(cè)糧食類、水果類、肉蛋類、蔬菜類、奶制品類、調(diào)料類、堅(jiān)果類、海鮮類、巧克力類、酵母類等90項(xiàng)食物特異性IgG。檢測(cè)的食物特異性IgG濃度水平分為陰性、輕度敏感、中度敏感、高度敏感4個(gè)級(jí)別。

4 過(guò)敏原檢測(cè)方法的評(píng)價(jià)

HSP患兒過(guò)敏原檢測(cè)是有效控制HSP復(fù)發(fā)的重要方面，雖然臨床上有許多的過(guò)敏原檢測(cè)方法可供選擇，但在具體應(yīng)用上有很多環(huán)節(jié)需要把握。 體內(nèi)方法檢測(cè)過(guò)敏原可以提供最為直接的依據(jù)，如：SPT簡(jiǎn)便易行，但常常需要多點(diǎn)針刺，對(duì)患兒造成的痛苦較大;患兒有較嚴(yán)格的條件限定，如：沒(méi)有皮膚病變，未使用過(guò)對(duì)皮膚反應(yīng)有影響的藥物，實(shí)驗(yàn)物質(zhì)必須保證除過(guò)敏原特性外不具毒性。體外實(shí)驗(yàn)方法較體內(nèi)實(shí)驗(yàn)方法更安全和符合倫理，但是沒(méi)有一種單一的試驗(yàn)?zāi)鼙ＷC其結(jié)果的準(zhǔn)確。體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)應(yīng)該互為補(bǔ)充，以得到準(zhǔn)確的特異性診斷。如：對(duì)于IgE介導(dǎo)的食物過(guò)敏，要結(jié)合sIgE及SPT判斷，如果兩者不一致，需要通過(guò)雙盲安慰劑食物激發(fā)試驗(yàn)來(lái)確定過(guò)敏原。

在過(guò)敏原檢測(cè)方法中有單一過(guò)敏原試驗(yàn)和過(guò)敏原篩查試驗(yàn)。單一過(guò)敏原試驗(yàn)只能回答具體的單一過(guò)敏原測(cè)定結(jié)果，而大部分患者并非只對(duì)某單一的過(guò)敏原有反應(yīng)，往往可能對(duì)多種過(guò)敏原過(guò)敏;此外臨床上常存在病史采集不詳或缺乏特異性過(guò)敏病史等情況，在選擇檢測(cè)過(guò)敏原的種類時(shí)很困難，因此目前臨床上通常選用多種過(guò)敏原混合體系進(jìn)行篩查。如篩查試驗(yàn)為陰性可不考慮單項(xiàng)過(guò)敏原檢測(cè)，如篩查陽(yáng)性可進(jìn)一步進(jìn)行單項(xiàng)過(guò)敏原測(cè)定。

在選擇檢測(cè)過(guò)敏原的方法及種類時(shí)，還需結(jié)合患兒的年齡、季節(jié)、氣候、地域、生活環(huán)境等特點(diǎn)，以提高過(guò)敏原檢測(cè)的特異性及敏感性。

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