羊用采精器的運用思考

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本文作者：王公金、徐小波、于建寧、陳哲、潘孝青 單位：江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所

材料與方法

1材料

(1)器材與藥品試劑主要試驗器材:普通硅膠管(外徑26mm，壁厚3mm);醫(yī)用無毒天然硅膠管(外徑19mm，內(nèi)徑11mm，壁厚4mm;執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn):Q/STXI－2004);人用天然膠乳橡膠避孕套［簡稱避孕套，超薄型，型號規(guī)格:(52±2)mm］;普通生物顯微鏡，保溫瓶(0．5～1．0L);載玻片與蓋玻片;輸精槍(不銹鋼或玻璃);全套常規(guī)假陰道采精器。主要藥品試劑:海綿陰道栓和氯前列烯醇為上海計劃生育研究所產(chǎn)品;促卵泡素(FSH)、孕馬血清促性腺激素(PMSG)和促黃體素釋放激素A3(LHRH－A3)均為寧波第二激素廠產(chǎn)品;PVP30(AR)、檸檬酸三鈉(AR)、葡萄糖(AR)、青霉素(醫(yī)用針劑)、鏈霉素(醫(yī)用針劑)、70%乙醇(AR)、生理鹽水(獸用)以及凡士林等不限生產(chǎn)商，隨意采購;卵黃液(臨用前從新鮮雞蛋中分離)。

(2)試驗地點與試驗動物本項研究主要在南京市六合區(qū)竹鎮(zhèn)鎮(zhèn)江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院實驗羊場、溧陽養(yǎng)羊合作社羊場、浙江湖州練市鎮(zhèn)志盛羊場和江蘇丘陵地區(qū)鎮(zhèn)江農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所附屬的茅山鎮(zhèn)江市農(nóng)牧科技示范園內(nèi)羊場實施。試驗羊群(♀、♂)群體數(shù)量達(dá)3000只，涉及種群為波爾山羊、波雜山羊、徐淮白山羊、杜泊綿羊、杜湖和杜寒雜交F1代綿羊、湖羊、小尾寒羊(年齡8月齡至4周歲，體重≥30kg)，其中母羊約2500只，公羊約500只。所有試驗羊群均按照常規(guī)舍飼模式飼養(yǎng)管理。

2方法

(1)內(nèi)置式采精器簡易制作與裝配制作方法:將普通硅膠管剪切成10或12cm長度管段作為假陰道套管(簡稱套管)，并在距一端1．3cm處環(huán)繞外表面刻出深度為1mm的凹槽。取醫(yī)用無毒天然硅膠管剪取成10cm或12cm管段作為假陰道內(nèi)襯管(簡稱內(nèi)襯管)，將套管和內(nèi)襯管清洗干凈后按常規(guī)高溫消毒方法消毒，備用。將避孕套數(shù)只完全展開，置于適量70%乙醇溶液中浸泡、漂洗數(shù)次，以除去其內(nèi)外表面涂敷的油漬，然后于50℃蒸餾水中反復(fù)漂洗，最后置于盛有50mL含雙抗(160萬單位青霉素和80萬單位鏈霉素)生理鹽水的具塞塑料試管中保存，備用。裝配方法從生理鹽水浸泡液中取出避孕套，擠壓出套內(nèi)大部分生理鹽水，爾后將內(nèi)襯管裝入避孕套開口端，使內(nèi)襯管一端開口與避孕套開口端平齊，形成內(nèi)襯管和避孕套組合體。將組合體裝入套管內(nèi)腔中，使組合體開口端與帶有外表面凹槽的套管開口端保持一致方向，并使組合體暴露出套管內(nèi)腔外約2cm長度，然后將組合體開口端內(nèi)腔向外翻卷，套在套管外表面上，最后用橡皮筋在套管圓柱體外壁凹槽處扎緊組合體，并在套管端口橡皮筋插入1枚回形針(其頂端與套管開口端平齊)，裝配成一套簡易的羊用內(nèi)置式采精器裝置，保持清潔，備用。

(2)采精操作方法與步驟在內(nèi)置式采精器試驗組(簡稱內(nèi)置采精組)中，將裝配好的簡易內(nèi)置式采精器開口用橡皮塞封住，整體浸入30～40℃溫水中保溫片刻，取出后除去橡皮塞，并在其開口處及深達(dá)處23cm內(nèi)腔和套管另一端外表面涂上少許凡士林。在羊舍內(nèi)選擇1只發(fā)情母羊或未發(fā)情的經(jīng)產(chǎn)母羊(四肢健壯，體型中等，體重≥25kg)作為臺羊，在自然站立保定情況下，清洗其外陰部，手持采精器裝置(開口端朝外)推入母羊陰道內(nèi)，使采精器開口端處于臺羊陰道口內(nèi)深約1cm為止。選擇擬采精種公羊與已置入采精器的臺羊，在其保定或自由活動情況下與公羊自然交配。一般情況下，公羊與發(fā)情臺羊交配不需要保定，而未發(fā)情臺羊需要在保定狀態(tài)下進(jìn)行。當(dāng)觀察到公羊爬跨臺羊，并完成典型射精動作后，立即隔離公羊，保定被交配后的臺羊，用帶手套的食指和拇指探入臺羊陰道內(nèi)抽出系在采精器端口外側(cè)的回形針，連帶取出該采精裝置。從采精器套管上剝離出組合體，直立狀態(tài)下從組合體開口端加入2mL生理鹽水，爾后從避孕套上抽出內(nèi)襯管，封閉避孕套開口端，輕輕上下翻轉(zhuǎn)數(shù)次，混勻避孕套內(nèi)精液，進(jìn)而保持開口端向上垂直片刻，使避孕套內(nèi)精液匯集于儲精囊內(nèi)。量取避孕套內(nèi)精液體積，取少許稀釋精液于載玻片上，壓上蓋玻片，置生物顯微鏡上觀察精子活力和密度，以便進(jìn)一步稀釋和冷藏處理，制備人工授精工作液。為了比較本內(nèi)置式采精器與常規(guī)假陰道采精器兩者采精操作優(yōu)缺點，本研究另外設(shè)置了常規(guī)假陰道采精試驗組(簡稱常規(guī)采精組)，采精操作實施過程中均使用相同的公羊和臺羊，其采集精液稀釋、品質(zhì)鑒定方法與內(nèi)置式采精器相同。上述采精操作于一年四季，分別在使用發(fā)情臺羊或未發(fā)情臺羊、室內(nèi)或露天、白晝或夜晚(有光照或無光照)以及雨雪等條件下進(jìn)行，由采精技術(shù)人員和隨機(jī)選擇的無采精操作經(jīng)驗人員實施，分別統(tǒng)計在各種環(huán)境條件下的采精效果(持續(xù)時間、難易以及成功率等)，綜合檢驗2種采精方式的操作效果。

(3)簡易采精技術(shù)在同期發(fā)情與人工授精中的應(yīng)用在2007—2011年5年期間春季和秋季配種季節(jié)，分別對大、中、小型山羊和綿羊養(yǎng)殖場舍飼母羊群進(jìn)行了分期分批同期發(fā)情技術(shù)推廣示范。其間，分別利用內(nèi)置式采精器和常規(guī)假陰道采精器采集波爾山羊、當(dāng)?shù)匕咨窖?、杜泊綿羊、雜交杜湖綿羊以及湖羊種公羊精液，采用石永忠［1］和聶曉偉等［8］方法制備精液工作液，分別進(jìn)行相同品種發(fā)情母羊人工授精，并于配種后觀察記錄妊娠率(以配種后2個月內(nèi)，即3個發(fā)情周期內(nèi)未見返情者判定為妊娠，反之判定為未妊娠)。統(tǒng)計評價2種方式采集精液的配種效果。

結(jié)果與分析

1不同操作人員和動物品種采精效果比較

經(jīng)5年來在全省大、中、小型羊場現(xiàn)場對江蘇現(xiàn)有山羊和綿羊種群采精示范比較試驗證明，對于任一品種羊群而言，未經(jīng)采精技術(shù)培訓(xùn)人員和經(jīng)過專門采精技術(shù)訓(xùn)練的專門采精員在良好環(huán)境和輔助設(shè)施條件下使用內(nèi)置式采精器采精成功率未顯示出明顯差異，均達(dá)到極高的采精成功率(93．1%以上)。而兩者使用傳統(tǒng)采精器則表現(xiàn)出顯著差異，采精成功率明顯下降，且未經(jīng)專門采精技術(shù)培訓(xùn)人員使用傳統(tǒng)采精器采精成功率顯著低于專門采精員(表1)。與傳統(tǒng)采精器相比較，上述結(jié)果證明內(nèi)置式采精器具有具有明顯的優(yōu)勢，基本不存在對采精操作技術(shù)(技巧)的依賴性，易于掌握使用，達(dá)到高效采精目的。

2不同環(huán)境氣候和設(shè)施條件下2種采精方法采精效果綜合評價

根據(jù)表2所列2種采精裝置使用評估數(shù)據(jù)分析，本羊用內(nèi)置式采精器裝置在12項評價指標(biāo)中，除采精量和采精密度2項沒有差異外，其余10項評價指標(biāo)［裝置結(jié)構(gòu)特點、制造成本、操作人員技術(shù)水平要求、安裝調(diào)試耗時、發(fā)情臺羊需要與否、采精公羊調(diào)教程度、操作程序簡便性、應(yīng)激反應(yīng)、環(huán)境和設(shè)施條件限制(光照、溫度以及室外雨雪等氣候)依賴性以及最佳條件下采精成功率］均顯著優(yōu)于傳統(tǒng)假陰道采精器。對于內(nèi)置式采精器而言，利用未發(fā)情的經(jīng)產(chǎn)母羊亦可輕松實現(xiàn)采精。在此情況下，傳統(tǒng)采精器是較難完成采精的。內(nèi)置式采精器采精過程基本是在自然本交過程中實現(xiàn)的，因此只要種公羊具備正常本交能力，即可成功采精，相比之下，利用傳統(tǒng)采精器采集未調(diào)教公羊精液是非常困難的。利用傳統(tǒng)采精裝置采精效率往往在很大程度上依賴于操作環(huán)境和設(shè)施條件優(yōu)劣，而內(nèi)置式采精器采精操作基本上不受環(huán)境和設(shè)施條件限制，甚至可在無光照、露天雨雪和低溫等環(huán)境氣候條件下成功采精，特別適于在基層羊養(yǎng)殖場簡陋條件下廣泛推廣應(yīng)用。顯然，由于內(nèi)置式采精器采精過程是在模擬自然本交的過程中完成的，故種畜和臺羊一般不會出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，操作安全性也較高。

3同期發(fā)情與人工授精的受胎率

采用內(nèi)置式采精器和常規(guī)假陰道采精器采集的精液精子密度和活力沒有發(fā)現(xiàn)任何區(qū)別，2種采精途徑獲得的精液采用相同的精液稀釋方法制備授精工作液，共進(jìn)行了30余批次(30～100只/批)同期發(fā)情山羊和綿羊人工授精，不同來源的精液工作液分別對任一相應(yīng)品種同期發(fā)情山羊或綿羊母羊群發(fā)情15h后一次性人工授精處理。經(jīng)統(tǒng)計分析表明，在發(fā)情后2個月(3個發(fā)情周期)內(nèi)所有母羊群妊娠率為71．2%～82．1%，對于同一種群母羊而言，不同來源的精液輸精后妊娠率未表現(xiàn)出顯著差異。這說明對于諸種山羊和綿羊種群而言，使用內(nèi)置式采精器和傳統(tǒng)的假陰道采精器獲得的精液品質(zhì)相互間沒有差別，均可相互替代推廣應(yīng)用于山羊和綿羊繁育科研和生產(chǎn)領(lǐng)域。

小結(jié)與討論

本文介紹的內(nèi)置式采精裝置可以在基層羊場簡陋條件下全天候使用，如露天雨雪環(huán)境、環(huán)境溫度較低以及晚上光照條件較差甚至黑暗條件下，皆可實施采精操作，整個操作過程基本不依賴于采精技巧水平。理論上講，只要種公畜具有正常本交能力，即可達(dá)到成功采精的目的。相比之下，傳統(tǒng)采精器成功采精與否則往往依賴于操作人員采精技術(shù)(技巧)水平發(fā)揮狀態(tài)，這體現(xiàn)了內(nèi)置式采精器獨特的“傻瓜式”采精操作特點。在規(guī)?；B(yǎng)羊產(chǎn)業(yè)發(fā)展過程中，該套內(nèi)置式采精裝置及其方法適于與同期發(fā)情和人工授精技術(shù)相結(jié)合，有效地解決種公畜基因資源的高效和合理利用難題，可望通過中試試驗進(jìn)一步改進(jìn)與完善，廣泛應(yīng)用于養(yǎng)羊業(yè)科研與生產(chǎn)領(lǐng)域。在將內(nèi)置式采精器安裝于臺羊陰道內(nèi)時偶爾會發(fā)生安裝困難或安裝后易于脫落等意外現(xiàn)象。出現(xiàn)該類現(xiàn)象的主要原因是臺羊選擇不當(dāng)，一般來講要盡可能選擇經(jīng)產(chǎn)母羊或發(fā)情母羊作為臺羊，其陰道收縮和擴(kuò)張狀況良好，這樣就不會發(fā)生安裝困難或脫落問題。如果在采精操作現(xiàn)場沒有發(fā)情母羊的情況下，應(yīng)盡可能選擇體型較大的山羊或綿羊作為臺羊，這樣采精器安裝比較容易，也不會傷害母羊陰道內(nèi)壁，采精之際最好在人工保定狀態(tài)下進(jìn)行，以確保采精成功。

一些缺乏本交經(jīng)驗和未經(jīng)調(diào)教的種羊采精過程中會出現(xiàn)爬跨后陰莖不能正確插入已裝入采精器的臺羊陰道的現(xiàn)象。解決的辦法是待公畜爬跨后伸出陰莖時采精人員可用手輕輕地在其包皮囊處把握，輔助調(diào)整陰莖伸出方向，使其對準(zhǔn)臺羊陰道口，從而成功導(dǎo)入，射精。對于那些體型較小的公畜采精時，應(yīng)適當(dāng)利用地勢高低環(huán)境條件，將臺羊保定于較低處，引導(dǎo)公畜處于地勢較高處爬跨，通常易于采精成功。