自薦信標(biāo)題精選(九篇)

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第1篇：自薦信標(biāo)題范文

關(guān)鍵詞：充電；表面電位；等離子體；低軌道

1 概述

據(jù)統(tǒng)計(jì)，空間環(huán)境誘發(fā)的衛(wèi)星故障，30%是等離子體對(duì)衛(wèi)星表面充電導(dǎo)致的[1]。引起衛(wèi)星表面充電的低能量電子和離子密度很大，表面充電經(jīng)常發(fā)生。近年來(lái)，航天仿真技術(shù)因具有成本低廉，操作性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)迅速發(fā)展，本文利用歐空局SPIS軟件建立等離子體對(duì)衛(wèi)星充電模型并進(jìn)行仿真計(jì)算，研究其對(duì)衛(wèi)星表面充電電位的影響。文中進(jìn)行電位比較不考慮正負(fù)，只考慮數(shù)值大小。

2 低軌道衛(wèi)星表面充電電位變化規(guī)律

2.1 低軌道空間等離子體環(huán)境

低軌道300km～500km高度等離子體密度最高，也是衛(wèi)星運(yùn)行的集中區(qū)域[2]，發(fā)生充電的幾率最大，我們利用SPIS軟件進(jìn)行充電仿真計(jì)算，研究等離子體環(huán)境對(duì)衛(wèi)星表面充電電位的影響。圖1和圖2分別是等離子體電子溫度Te和離子溫度Ti隨高度變化圖。

2.2衛(wèi)星表面充電電位仿真計(jì)算

表面電位V是表征衛(wèi)星表面充電特性的最重要參數(shù)，假設(shè)衛(wèi)星均勻充電，我們用軟件計(jì)算衛(wèi)星充電情況，得出V在Te和Ti變化時(shí)隨不同時(shí)間段變化圖3和圖4。

圖3中，在等離子體密度N=7×1011m-3，Ti=0.086eV（400km）條件下，V在T=175μs時(shí)達(dá)到最大值，此后保持不變。曲線①為T(mén)e=0.190eV時(shí)，衛(wèi)星表面充電電位V=-0.285V；②為T(mén)e=0.207eV時(shí)，V=-0.327V；③為T(mén)e=0.224eV時(shí)，V=-0.371V。

圖4中，在N=7×1011m-3，Te=0.207eV（400km）條件下，V在T=175μs時(shí)達(dá)到最大值，此后保持不變。①為T(mén)i=0.121eV時(shí)，V=-0.293V；②為T(mén)i=0.086eV時(shí)，V=-0.321V；③為T(mén)i=0.060eV時(shí)，V=-0.327V。

從圖3和圖4可知，V在初始階段變化明顯，此后變化趨于平緩，一定時(shí)間后達(dá)到固定值并保持不變。Te和Ti不同的情況下，V的大小是不同的。在N和Ti一定時(shí)，相同時(shí)間內(nèi)，Te越高，V越高。而在N和Te一定時(shí)，相同時(shí)間內(nèi)， Ti越高V越低。

2.3 衛(wèi)星表面充電電位變化理論分析

V變化逐漸趨緩并最終保持不變是因?yàn)殡娮恿髅芏仍诔跏茧A段大，V迅速增大，其產(chǎn)生的負(fù)電場(chǎng)顯著增大，造成流向衛(wèi)星表面的離子密度流逐漸增大，電子流密度逐漸減小，使V變化緩慢，最終電子流密度和離子流密度達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡，V達(dá)到最大值并保持不變。Te越高V越高，Ti越高V越低是因?yàn)殡S著Ti升高，離子運(yùn)動(dòng)速度加快，從而充電過(guò)程中，快速移向衛(wèi)星表面并中和衛(wèi)星表面的電子，使衛(wèi)星表面電位降低。

3 結(jié)束語(yǔ)

通過(guò)利用SPIS軟件進(jìn)行仿真計(jì)算我們發(fā)現(xiàn)，等離子體中電子溫度越高，達(dá)到充電平衡時(shí)的電位數(shù)值越大；而離子溫度越高，電位數(shù)值越小。與離子溫度相比，電子溫度的改變引起充電電位的變化更加明顯，因此表面充電電位數(shù)值隨軌道高度增加而逐漸增大。隨著高度增加，電子溫度繼續(xù)升高，離子溫度變化越來(lái)越小。通常情況下，對(duì)高度1000km以上低軌道區(qū)域進(jìn)行計(jì)算時(shí)，不考慮離子溫度的影響，可以使模型簡(jiǎn)單化，提高計(jì)算速度并且對(duì)結(jié)果影響不大。低軌道通信衛(wèi)星表面充電是影響其運(yùn)行安全的重要因素，研究等離子體溫度對(duì)充電電位數(shù)值的影響可以為我們對(duì)衛(wèi)星進(jìn)行防護(hù)提高參考。

參考文獻(xiàn)

第2篇：自薦信標(biāo)題范文

關(guān)鍵詞：DNA 計(jì)算；分子信標(biāo)；NP\完全問(wèn)題；Hamilton圈

中圖分類(lèi)號(hào)：O157.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1672-1098（2016）01-0030-04

Abstract： In order to solve the classical problems in graph theory and develop a new molecular structure by using DNA， based on the principle that different forms of fluorescent molecular-quenching molecular in the molecular beacon constitutes multi color molecular beacon， the detection model for the solution of Hamilton circle， the NP\complete problem， was given. The model has the advantages of simple encoding， low complexity， easy to detect and so on.

Key words：DNA computing； molecular beacon； NP\complete problem； Hamilton circle

1994年，文獻(xiàn)[1]首次在實(shí)驗(yàn)室用DNA分子解決了一個(gè)含有7個(gè)城市的Hmilton有向路問(wèn)題，自此，誕生了一個(gè)新的研究領(lǐng)域――DNA計(jì)算。1996年，文獻(xiàn)[2]首次建立分子信標(biāo)（molecularbeacon，MBs）探針，其作為一種新型的熒光探針在近年來(lái)得到廣泛的應(yīng)用和發(fā)展[3-6]。

繼Adleman博士的著名實(shí)驗(yàn)之后，有關(guān)Hmilton路的一些其他問(wèn)題的DNA計(jì)算也取得了一些進(jìn)展[7-8]。除了在電子計(jì)算機(jī)和DNA計(jì)算機(jī)上的算法研究外，部分學(xué)者還在理論上對(duì)Hmilton問(wèn)題進(jìn)行了一定的討論[9]。通過(guò)選擇不同的熒光分子-猝滅分子對(duì)可以設(shè)計(jì)出不同熒光的分子信標(biāo)（稱(chēng)多色分子信標(biāo)），每個(gè)分子信標(biāo)與其各自的靶標(biāo)序列雜交后，會(huì)釋放不同顏色的熒光，此時(shí)，通過(guò)熒光檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)不同的顏色來(lái)解決問(wèn)題，這樣可以使多個(gè)靶核苷酸同時(shí)定量測(cè)定且加以區(qū)別，本文基于上述原理設(shè)計(jì)了一個(gè)Hmilton圈問(wèn)題解的檢測(cè)模型。

關(guān)于Hmilton問(wèn)題的部分?jǐn)?shù)學(xué)描述如下：包含圖G的每個(gè)頂點(diǎn)的路稱(chēng)為G的Hmilton路；包含圖G的每個(gè)頂點(diǎn)的圈稱(chēng)為G的Hmilton圈；一個(gè)圖包含HaInilton圈，則稱(chēng)這個(gè)圖是Hmilton圖。對(duì)于n階圖G，如果G含長(zhǎng)度是n的圈，則稱(chēng)G是Hamilton圖[10]。Hmilton圈問(wèn)題是圖論最古老的研究課題之一，是至今未解決的世界難題，在許多領(lǐng)域有著重要應(yīng)用，同時(shí)，它也是一個(gè)典型的NP-完全問(wèn)題。

1分子信標(biāo)原理

分子信標(biāo)是一種設(shè)計(jì)巧妙的新型熒光探針，主要由環(huán)和莖桿部分組成。環(huán)上的寡聚核苷酸序列是分子信標(biāo)的基因識(shí)別區(qū)，它能與靶基因自發(fā)地進(jìn)行雜交；莖部是一段5～8mer序列互補(bǔ)的發(fā)夾結(jié)構(gòu)。在分子信標(biāo)的5’端和3’端通過(guò)連接臂連接上熒光素和猝滅劑。一般用EDANS（1一氨基萘一8一羧酸）為熒光素，用DABCYL（二甲氨基偶氮苯甲酰）為猝滅劑（見(jiàn)圖1）。當(dāng)莖桿部分解鏈后“發(fā)夾”就會(huì)打開(kāi)從而變成單鏈分子。在原始狀態(tài)下，分子信標(biāo)呈莖環(huán)結(jié)構(gòu)，當(dāng)熒光分子與猝滅分子靠近（約為7～10 nm），即可發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移，此時(shí)，熒光分子發(fā)出的熒光被猝滅分子吸收并以熱的形式散發(fā)，檢測(cè)不到熒光信號(hào)。分子信標(biāo)的工作原理如圖2所示，當(dāng)有靶序列存在時(shí)，分子信標(biāo)的環(huán)部即可與靶序列特異性結(jié)合，形成的雙鏈比分子信標(biāo)的莖環(huán)結(jié)構(gòu)更穩(wěn)定，熒光分子與猝滅分子分開(kāi)，熒光分子發(fā)出的熒光不能被猝滅分子吸收，這時(shí)可檢測(cè)到熒光，且所檢測(cè)到的熒光強(qiáng)度與溶液中靶標(biāo)的量成正比。本模型利用金屬納米簇作猝滅劑，通過(guò)調(diào)節(jié)金屬簇的大小、形狀和組成而得到不同種的熒光，形成多色分子信標(biāo)用于同時(shí)定量標(biāo)記。

2） 由步驟1得到通過(guò)圖G中的所有頂點(diǎn)的可能路徑集，由于使用的分子信標(biāo)探針P0，P1，P2，P3，P4，P5的熒光不同，可通過(guò)熒光檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)出帶有（且僅帶有）這六種熒光的鏈，并保留。此時(shí)，便得到了通過(guò)圖G中的每個(gè)頂點(diǎn)（且一次）的路徑，即hamilton路。

32.3步驟3

以圖3a為例，根據(jù)步驟1的編碼規(guī)則，若步驟2所得片段構(gòu)成hamilton圈，其產(chǎn)物的最后必定為v0編碼的前10 bp寡聚核苷酸片段。

制作以v0前10 bp寡聚核苷酸片段互補(bǔ)序列為環(huán)部的分子信標(biāo)探針P（見(jiàn)圖4b），與步驟3的生成產(chǎn)物進(jìn)行反應(yīng)，通過(guò)檢測(cè)熒光發(fā)光點(diǎn)的位置，判斷是否為Hamilton圈。

324步驟4

若路徑滿足上述條件，則說(shuō)明存在Hamilton圈，對(duì)步驟4的結(jié)果采用非放射性標(biāo)記DNA測(cè)序的方法，進(jìn)行測(cè)序，讀出結(jié)果，否則，不存在Hamilton圈。

4結(jié)束語(yǔ)

分子信標(biāo)具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、靈敏度高及易觀測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，此技術(shù)在特定情況下能夠把核酸序列轉(zhuǎn)化為熒光信息。本文基于分子信標(biāo)的這些特性建立了Hamilton圈問(wèn)題的分子信標(biāo)檢測(cè)模型。通過(guò)多色分子信標(biāo)同時(shí)標(biāo)記，大大減少了DNA計(jì)算的過(guò)程，具有一定的學(xué)術(shù)研究意義。此模型的復(fù)雜程度與頂點(diǎn)數(shù)和頂點(diǎn)的度有關(guān)。當(dāng)然，并非由此模型生成的混合物都是問(wèn)題的解，還需要通過(guò)刪選、檢測(cè)過(guò)程進(jìn)行判斷。如果一個(gè)圖中不存在Hamilton圈，那么最后溶液中就不會(huì)生成可以表示Hamilton圈的分子。此外，DNA計(jì)算所應(yīng)用的各種生物技術(shù)自身也存在著一定誤差，尤其是PCR技術(shù)。但隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，這些問(wèn)題將會(huì)得到完善與解決。

參考文獻(xiàn)：

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第3篇：自薦信標(biāo)題范文

關(guān)鍵詞：戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)類(lèi)企業(yè) 融資能力 評(píng)價(jià)指標(biāo)體系

一、引言

近年來(lái)，戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)成為國(guó)家經(jīng)濟(jì)發(fā)展重點(diǎn)扶持對(duì)象，該產(chǎn)業(yè)屬于技術(shù)依賴(lài)型產(chǎn)業(yè)，具有資源能耗低、帶動(dòng)系數(shù)大、就業(yè)機(jī)會(huì)多、綜合效益好、市場(chǎng)前景廣等特征。不過(guò)，就目前國(guó)內(nèi)該產(chǎn)業(yè)發(fā)展情況來(lái)看，該類(lèi)產(chǎn)業(yè)還處于初級(jí)發(fā)展階段，從外部市場(chǎng)到內(nèi)部管理都沒(méi)有達(dá)到一定水平，資金實(shí)力較弱，發(fā)展規(guī)模偏小，目標(biāo)市場(chǎng)還未成熟，擁有專(zhuān)利技術(shù)較少，研發(fā)人才短缺且流動(dòng)性較大，產(chǎn)業(yè)化水平較低，這些問(wèn)題都嚴(yán)重制約了該類(lèi)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。在眾多問(wèn)題中，最根本問(wèn)題在于該類(lèi)產(chǎn)業(yè)普遍資金實(shí)力較弱，因此，解決該類(lèi)產(chǎn)業(yè)資金問(wèn)題是重中之重。

大部分戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)中的企業(yè)屬于中小企業(yè)，因此，該類(lèi)企業(yè)具有大多數(shù)國(guó)內(nèi)中小企業(yè)的發(fā)展特點(diǎn)，所面臨的困難也有一定相似性，最大的相似點(diǎn)在于融資困難，各類(lèi)金融機(jī)構(gòu)對(duì)于新興產(chǎn)業(yè)類(lèi)型的企業(yè)重視度不夠，貸款程序復(fù)雜，條件較高，這些都導(dǎo)致該類(lèi)企業(yè)融資困難，嚴(yán)重限制了該類(lèi)企業(yè)的發(fā)展。因此，為準(zhǔn)確衡量和評(píng)價(jià)戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)類(lèi)企業(yè)自身的融資實(shí)力，有效規(guī)避銀行放貸風(fēng)險(xiǎn)，提高貸款資金的盈利能力，推動(dòng)該類(lèi)產(chǎn)業(yè)產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程，提升整體產(chǎn)業(yè)水平，應(yīng)從該類(lèi)企業(yè)本身研究衡量其融資能力的指標(biāo)，并構(gòu)建一套完整、科學(xué)、系統(tǒng)的指標(biāo)體系。

二、戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)類(lèi)企業(yè)融資能力評(píng)價(jià)指標(biāo)選取原則及來(lái)源

為準(zhǔn)確、客觀、系統(tǒng)地評(píng)價(jià)戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)的融資能力，保證指標(biāo)選取的有效性和有用性，依據(jù)原則有：量化原則、數(shù)據(jù)可得性原則、指標(biāo)代表性原則、相對(duì)量指標(biāo)原則、動(dòng)態(tài)與可持續(xù)性原則。

指標(biāo)選取來(lái)源主要結(jié)合該類(lèi)企業(yè)在發(fā)展過(guò)程中面臨的各項(xiàng)風(fēng)險(xiǎn)來(lái)選擇確定，這些風(fēng)險(xiǎn)包括：

第一，技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。由于該類(lèi)產(chǎn)業(yè)屬于技術(shù)依賴(lài)型，而現(xiàn)階段國(guó)內(nèi)相關(guān)技術(shù)都還在起步階段，在技術(shù)研發(fā)過(guò)程中可能會(huì)存在如技術(shù)研發(fā)周期較長(zhǎng)、技術(shù)研發(fā)失敗、研發(fā)機(jī)構(gòu)的合作關(guān)系中斷、先進(jìn)技術(shù)的應(yīng)用性較小、科技轉(zhuǎn)化率低等問(wèn)題，這些問(wèn)題都嚴(yán)重制約了該類(lèi)企業(yè)的發(fā)展。

第二，市場(chǎng)風(fēng)險(xiǎn)。由于戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)在我國(guó)還屬于新興產(chǎn)業(yè)，市場(chǎng)需求還沒(méi)有足夠開(kāi)發(fā)，或者說(shuō)市場(chǎng)需求不夠旺盛，盲目放貸給該類(lèi)企業(yè)可能會(huì)導(dǎo)致供需失衡、產(chǎn)能過(guò)剩等后果。因此，該類(lèi)企業(yè)的市場(chǎng)風(fēng)險(xiǎn)往往也比較大。

第三，財(cái)務(wù)風(fēng)險(xiǎn)。受市場(chǎng)環(huán)境影響，該類(lèi)企業(yè)初期經(jīng)營(yíng)績(jī)效往往不會(huì)太好，這會(huì)嚴(yán)重影響到企業(yè)經(jīng)營(yíng)收益情況，如果企業(yè)不能持續(xù)盈利，現(xiàn)金流斷裂會(huì)使企業(yè)未來(lái)發(fā)展陷入僵局。

第四，宏觀政策風(fēng)險(xiǎn)。這些政策風(fēng)險(xiǎn)主要來(lái)自于國(guó)家的財(cái)稅政策、技術(shù)政策、行業(yè)扶持政策。一旦國(guó)家發(fā)揮“看得見(jiàn)的手”的作用，對(duì)該類(lèi)產(chǎn)業(yè)扶持力度加大，那么就會(huì)引起該類(lèi)產(chǎn)業(yè)水平整體提升，盈利能力增強(qiáng)，市場(chǎng)逐步擴(kuò)大，而如果國(guó)家放棄扶持，那么其發(fā)展速度會(huì)受到嚴(yán)重制約。因此，國(guó)家的相關(guān)政策在該類(lèi)產(chǎn)業(yè)發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著主導(dǎo)作用。

三、戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)類(lèi)企業(yè)融資能力評(píng)價(jià)指標(biāo)體系內(nèi)容

通過(guò)分析研究該類(lèi)企業(yè)存在風(fēng)險(xiǎn)，結(jié)合實(shí)際發(fā)展情況，本文構(gòu)建技術(shù)指標(biāo)、財(cái)務(wù)指標(biāo)和宏觀環(huán)境指標(biāo)三個(gè)一級(jí)指標(biāo)，并分設(shè)二級(jí)、三級(jí)指標(biāo)來(lái)全面衡量評(píng)價(jià)該類(lèi)企業(yè)的融資能力。

1.技術(shù)指標(biāo)

（1）研發(fā)實(shí)力指標(biāo)

①企業(yè)研發(fā)人員數(shù)量比值=研發(fā)人員總數(shù)/企業(yè)員工總數(shù)；

②企業(yè)研發(fā)人員結(jié)構(gòu)比值=研發(fā)人員中各類(lèi)學(xué)歷人數(shù)/企業(yè)研發(fā)人員總數(shù)；

③企業(yè)研發(fā)經(jīng)費(fèi)投入比重=當(dāng)年研發(fā)經(jīng)費(fèi)總額/企業(yè)當(dāng)年各項(xiàng)經(jīng)費(fèi)總額；

④企業(yè)引進(jìn)人才投入比重=（研發(fā)人才引入成本+研發(fā)人才培養(yǎng)成本）/ 人力資源總成本；

⑤企業(yè)研發(fā)合作投入比重=企業(yè)與外單位合作研發(fā)經(jīng)費(fèi)投入額/企業(yè)科研經(jīng)費(fèi)投入總額。

（2）技術(shù)實(shí)力指標(biāo)

①自有技術(shù)項(xiàng)目數(shù)量比值=企業(yè)自主研發(fā)專(zhuān)利技術(shù)數(shù)量/企業(yè)技術(shù)總數(shù)；

②引進(jìn)技術(shù)項(xiàng)目數(shù)量比值=企業(yè)引進(jìn)技術(shù)項(xiàng)目數(shù)量/企業(yè)技術(shù)總數(shù)；

③企業(yè)專(zhuān)利產(chǎn)出比率=企業(yè)在某技術(shù)領(lǐng)域的專(zhuān)利申請(qǐng)量 / 該技術(shù)領(lǐng)域所有專(zhuān)利申請(qǐng)量的比例；

④企業(yè)科技論文產(chǎn)出比率=企業(yè)當(dāng)年科技數(shù)量/行業(yè)當(dāng)年科技總數(shù)；

⑤企業(yè)技術(shù)市場(chǎng)成交率=企業(yè)在技術(shù)市場(chǎng)中成交合同金額/企業(yè)當(dāng)年科研經(jīng)費(fèi)總額；

⑥企業(yè)配套技術(shù)數(shù)量比值=企業(yè)配套技術(shù)數(shù)量/企業(yè)技術(shù)總數(shù)。

2.財(cái)務(wù)指標(biāo)

（1）盈利能力指標(biāo)

①主營(yíng)業(yè)務(wù)利潤(rùn)率=利潤(rùn)/主營(yíng)業(yè)務(wù)收入凈額；

②資產(chǎn)凈利率=凈利潤(rùn)/平均資產(chǎn)總額；

③凈資產(chǎn)收益率=凈利潤(rùn)/平均凈資產(chǎn)；

④成本費(fèi)用利用率=利潤(rùn)總額/成本費(fèi)用總額。

（2）營(yíng)運(yùn)能力指標(biāo)

①應(yīng)收賬款周轉(zhuǎn)率是指應(yīng)收賬款周轉(zhuǎn)次數(shù)，即賒銷(xiāo)凈額/應(yīng)收賬款平均余額；和應(yīng)收賬款周轉(zhuǎn)天數(shù)，即日歷天數(shù)/應(yīng)收賬款周轉(zhuǎn)次數(shù)；

②存貨周轉(zhuǎn)率包括存貨周轉(zhuǎn)次數(shù)，即銷(xiāo)貨成本/存貨平均余額；存貨周轉(zhuǎn)天數(shù)，即日歷天數(shù)/存貨周轉(zhuǎn)次數(shù)；

③流動(dòng)資產(chǎn)周轉(zhuǎn)率，即流動(dòng)資產(chǎn)周轉(zhuǎn)次數(shù)=流動(dòng)資產(chǎn)周轉(zhuǎn)額/流動(dòng)資產(chǎn)平均占用額；

④總資產(chǎn)周轉(zhuǎn)率，包括總資產(chǎn)周轉(zhuǎn)次數(shù)，即產(chǎn)品銷(xiāo)售收入/資產(chǎn)平均總額；總資產(chǎn)周轉(zhuǎn)天數(shù)，即日歷天數(shù)/總資產(chǎn)周轉(zhuǎn)次數(shù)。

（3）發(fā)展能力

①營(yíng)業(yè)收入增長(zhǎng)率=（當(dāng)年?duì)I收額-上年?duì)I收額）/上年?duì)I收額；

②資本保值增值率=扣除客觀因素后的本年末所有者權(quán)益總額/年初所有者權(quán)益總額；

③總資產(chǎn)增長(zhǎng)率=當(dāng)年總資產(chǎn)增長(zhǎng)額/年初資產(chǎn)總額；

④營(yíng)業(yè)利潤(rùn)增長(zhǎng)率=當(dāng)年?duì)I業(yè)利潤(rùn)增長(zhǎng)額/上年?duì)I業(yè)利潤(rùn)總額；

⑤市場(chǎng)份額增長(zhǎng)率=（當(dāng)年市場(chǎng)份額-上年市場(chǎng)份額）/ 上年市場(chǎng)份額。

（4）財(cái)務(wù)抗風(fēng)險(xiǎn)能力

該類(lèi)企業(yè)的財(cái)務(wù)風(fēng)險(xiǎn)主要從企業(yè)自身的償債能力來(lái)評(píng)價(jià)。

①流動(dòng)比率=流動(dòng)資產(chǎn)/流動(dòng)負(fù)債；

②速動(dòng)比率=速動(dòng)資產(chǎn)/流動(dòng)負(fù)債；

③資產(chǎn)負(fù)債率=負(fù)債總額/資產(chǎn)總額

④資本負(fù)債率=負(fù)債總額/所有者權(quán)益總額

⑤無(wú)形資產(chǎn)負(fù)債率=負(fù)債總額/無(wú)形資產(chǎn)

⑥稅費(fèi)占營(yíng)運(yùn)資金比率=企業(yè)繳納稅費(fèi)總額/（流動(dòng)資產(chǎn)-流動(dòng)負(fù)債）

⑦利息保障倍數(shù)=EBIT/利息費(fèi)用

3.宏觀環(huán)境指標(biāo)

（1）政策法律環(huán)境指標(biāo)

①科技資金占財(cái)政總支出比例=當(dāng)?shù)卣?cái)政科技撥款/當(dāng)?shù)卣?cái)政總支出；

②政府支撐政策條款數(shù)量是指政府在相關(guān)政策條例中所規(guī)定的對(duì)該類(lèi)產(chǎn)業(yè)的支撐條款數(shù)量；

③企業(yè)科技研發(fā)經(jīng)費(fèi)中政府資金占比=政府科技投入資金/企業(yè)總研發(fā)經(jīng)費(fèi)；

④稅收減免幅度=（某項(xiàng)新實(shí)施稅率-舊實(shí)施稅率）/舊實(shí)施稅率；

⑤政府為該類(lèi)企業(yè)提供擔(dān)保數(shù)量是指當(dāng)?shù)卣疄樵擃?lèi)企業(yè)提供擔(dān)保的企業(yè)總數(shù)；

⑥知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)條款數(shù)量是指國(guó)家法律法規(guī)條款中保護(hù)該類(lèi)產(chǎn)業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的條款數(shù)量。

（2）市場(chǎng)環(huán)境指標(biāo)

①目標(biāo)市場(chǎng)人均收入水平主要反映目標(biāo)市場(chǎng)是否有足夠能力支持該類(lèi)企業(yè)的產(chǎn)品或服務(wù)；

②目標(biāo)市場(chǎng)恩格爾系數(shù)=目標(biāo)市場(chǎng)食品支出總額/個(gè)人消費(fèi)支出總額

③該類(lèi)產(chǎn)業(yè)對(duì)GDP貢獻(xiàn)率=行業(yè)產(chǎn)值/GDP總量

④市場(chǎng)潛在需求量主要反映該類(lèi)產(chǎn)業(yè)是否有足夠市場(chǎng)需求，該指標(biāo)涉及到該類(lèi)產(chǎn)業(yè)是否能長(zhǎng)足發(fā)展；

⑤該行業(yè)銷(xiāo)售額增長(zhǎng)率=（當(dāng)年行業(yè)總銷(xiāo)售額-上年行業(yè)總銷(xiāo)售額）/上年行業(yè)總銷(xiāo)售額。

（3）技術(shù)環(huán)境指標(biāo)

①行業(yè)研發(fā)經(jīng)費(fèi)投入比值=行業(yè)研發(fā)經(jīng)費(fèi)投入額/行業(yè)總投入額

②行業(yè)技術(shù)成果轉(zhuǎn)化率=已產(chǎn)業(yè)化的技術(shù)成果數(shù)量/行業(yè)技術(shù)成果總量

③行業(yè)技術(shù)引進(jìn)消化吸收率=消化吸收的技術(shù)數(shù)量/引進(jìn)技術(shù)總量

④行業(yè)技術(shù)市場(chǎng)成交率=技術(shù)市場(chǎng)成交合同金額/研發(fā)經(jīng)費(fèi)支出

⑤技術(shù)人才流動(dòng)率=年技術(shù)人才流動(dòng)量/總?cè)瞬艛?shù)量

⑥萬(wàn)人發(fā)明專(zhuān)利擁有量=年末發(fā)明專(zhuān)利擁有量/年末總?cè)丝?，指每萬(wàn)人擁有經(jīng)國(guó)內(nèi)外知識(shí)產(chǎn)權(quán)行政部門(mén)授權(quán)且在有效期內(nèi)的發(fā)明專(zhuān)利件數(shù)。是衡量一個(gè)國(guó)家或地區(qū)科研產(chǎn)出質(zhì)量和市場(chǎng)應(yīng)用水平的綜合指標(biāo)。

四、結(jié)論與不足

通過(guò)對(duì)戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)類(lèi)企業(yè)融資能力評(píng)價(jià)指標(biāo)體系的構(gòu)建，為金融機(jī)構(gòu)特別是銀行明確了放貸標(biāo)準(zhǔn)，為有效評(píng)價(jià)其貸款安全性和盈利性打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)，初步保證銀行貸款安全、可靠，同時(shí)，對(duì)于該類(lèi)企業(yè)，可以使其結(jié)合自身實(shí)際經(jīng)營(yíng)發(fā)展情況從以上這些指標(biāo)著手逐步培養(yǎng)自身的融資能力，提高未來(lái)獲得銀行資金支持的可能性。不過(guò)，戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)類(lèi)企業(yè)雖然有共同之處，但是由于涉及行業(yè)有七項(xiàng)，而以上提出的指標(biāo)只是針對(duì)共性提出的，對(duì)于行業(yè)特殊性方面，并未能完全體現(xiàn)，因此，還應(yīng)在實(shí)際考察某項(xiàng)具體行業(yè)企業(yè)時(shí)，結(jié)合行業(yè)特點(diǎn)補(bǔ)充或者減少具體評(píng)價(jià)指標(biāo)的項(xiàng)目。

參考文獻(xiàn)：

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[2]孫威武. 企業(yè)技術(shù)創(chuàng)新項(xiàng)目風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)[J]. 中南財(cái)經(jīng)政法大學(xué)學(xué)報(bào)，2004（1）

[3]潘奇才，劉鐵兵. 高技術(shù)企業(yè)綜合水平的評(píng)價(jià)方法研究[J]. 科研管理，1996（1）

第4篇：自薦信標(biāo)題范文

[關(guān)鍵詞] 新疆紫草;過(guò)表達(dá)載體;RNAi載體;GATEWAY技術(shù)

[收稿日期] 2014-06-18

[基金項(xiàng)目] 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81130070，81072989）;國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（2012BAI29B02，2012BAI28B002）

[通信作者] *郭蘭萍，Tel：（010）64011944，E-mail：

[作者簡(jiǎn)介] 謝騰，碩士，Tel：18310830559，E-mail：

新疆紫草Arnebia euchroma （Royle） Johnst是藥用紫草的主要來(lái)源[1]，其重要成分紫草素類(lèi)化合物具有止血、抗癌、抗HIV等多種藥理活性[2-4]，同時(shí)也是天然的化工染料和食品添加劑[5-6]。

紫草素類(lèi)化合物通常認(rèn)為是在限速酶苯丙氨酸解氨酶（PAL）、甲戊二羥酸單酰輔酶A還原酶（HMGR）和對(duì)羥基苯甲酸香葉基轉(zhuǎn)移酶（PGT）催化下，通過(guò)苯丙氨酸（phenylpropan-oid，PP）-甲羥戊酸（mevalonate，MVA）復(fù)合途徑合成。PAL是PP途徑中的起始代謝酶，催化L-苯丙氨酸生成反式肉桂酸，進(jìn)而開(kāi)啟對(duì)羥基苯甲酸（PHB）的合成。MVA途徑上的HMGR將甲戊二羥酸單酰輔酶A還原為甲戊二羥酸，進(jìn)而生成PP和MVA途徑的中間產(chǎn)物焦磷酸香葉酯（GPP）。最后PHB，GPP在PGT的催化下合成紫草素類(lèi)化合物前體香葉基-對(duì)羥基苯甲酸（GHB）[7-8]。

次生代謝通路上關(guān)鍵酶基因表達(dá)的變化會(huì)影響次生代謝物的生物合成，可以通過(guò)改變某特定基因的表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)下游次生代謝，即基因的過(guò)表達(dá)（或超表達(dá)）和RNA干擾（RNA interference， RNAi）技術(shù)，控制目標(biāo)代謝產(chǎn)物的合成。為此，本研究擬構(gòu)建新疆紫草次生代謝途徑中關(guān)鍵酶基因PAL，HMGR，PGT過(guò)表達(dá)和RNA干擾載體，為培育新疆紫草次生代謝物高產(chǎn)株系和次生代謝相關(guān)基因的功能驗(yàn)證奠定基礎(chǔ)。

1 材料

新疆紫草愈傷細(xì)胞取自中國(guó)科學(xué)院植物研究所葉和春研究員處。

基因過(guò)表達(dá)載體pH7WG2D和RNA干擾載體pK7GWIWG2D均由中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥資源中心提供。

2 方法

2.1 目的基因序列的獲取和引物設(shè)計(jì)

在NCBI（http：//ncbi.nlm.nih.gov/）下載目的基因序列：PAL（gi|90994675），HMGR（gi|91208650），PGT（gi|158957516）。

過(guò)表達(dá)載體的片段為目標(biāo)基因的全長(zhǎng)，引物位于ORF外，RNA干擾的片段引物位于ORF內(nèi)。使用Primer Premier 5分別設(shè)計(jì)含CACC接頭和不加CACC接頭的合適引物。

2.2 新疆紫草cDNA的獲得

采用Trizol法新疆紫草愈傷組織細(xì)胞總RNA提取，并做RNA質(zhì)量檢測(cè)。使用TaKaRa PrimeScript 1st strand cDNA Synthesis Kit試劑盒，將新疆紫草新鮮RNA反轉(zhuǎn)錄為單鏈cDNA，并至于-20 ℃保存。

2.3 PCR擴(kuò)增

2.3.1 通用PCR擴(kuò)增 使用TaKaRa Ex Taq酶做普通PCR擴(kuò)增，所用引物不加CACC接頭。1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)并測(cè)序。

2.3.2 菌液PCR擴(kuò)增 使用TaKaRa Taq酶做菌液PCR擴(kuò)增，所用引物不加CACC接頭。1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)并測(cè)序。

2.3.3 高保真PCR擴(kuò)增 使用Phusion High-Fidelity DNA Polymerase PCR酶做高保真PCR擴(kuò)增，以T載體克隆所得質(zhì)粒為DNA模版，所用引物含CACC接頭。1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)并測(cè)序。

2.4 PCR產(chǎn)物的回收與純化

PCR擴(kuò)增產(chǎn)物回收與純化使用生工SanPrep柱式DNA膠回收試劑盒。將所得到的DNA保存于-20 ℃。

2.5 PCR產(chǎn)物的T載體克隆

PCR產(chǎn)物的T載體克隆使用Promega的pGEM-T EasyVector Systems，4 ℃水浴過(guò)夜，轉(zhuǎn)入DH5α，LB平板（氨芐霉素，Amp抗性）培養(yǎng)過(guò)夜，篩選菌落并菌液PCR驗(yàn)證。1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)并測(cè)序。

2.6 轉(zhuǎn)化大腸桿菌

選擇Trans5α感受態(tài)細(xì)胞，吸取200 μL已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素LB瓊脂培養(yǎng)基上，均勻涂開(kāi)細(xì)胞，至液體被吸收，倒置平板，37 ℃過(guò)夜培養(yǎng)。篩選菌落并菌液PCR驗(yàn)證，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)并測(cè)序。

2.7 質(zhì)粒提取

質(zhì)粒DNA提取使用QIAprep Spin Miniprep Kit試劑盒。

2.8 GATEWAY方法構(gòu)建載體

GATEWAY技術(shù)是基于λ噬菌點(diǎn)特異性的成熟重組體系，由BP，LR 2個(gè)反應(yīng)就構(gòu)成，可同時(shí)轉(zhuǎn)化多個(gè)基因，較其他載體構(gòu)建方法快捷高效[9]。BP反應(yīng)將目的基因從PCR產(chǎn)物重組到供體載體，從而形成入門(mén)載體（donor vector），LR反應(yīng)則將入門(mén)克隆重組入目的載體（destination vector）[10-11]。

2.8.1 BP連接反應(yīng) 使用Invitrogen公司pENTRTM SD/D-TOPO Vector做入門(mén)載體連接高保真PCR產(chǎn)物。在微量離心管中配制BP反應(yīng)混合液（3 μL體系）：1.5 μL ddH2O，0.5 μL 高保真PCR產(chǎn)物，0.5 μL salt solution，0.5 μL 入門(mén)載體。22 ℃水浴3 h，轉(zhuǎn)入DH5α，LB平板（卡那霉素，Kana抗性）培養(yǎng)過(guò)夜，篩選菌落并菌液PCR驗(yàn)證。1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)并測(cè)序。

2.8.2 LR連接反應(yīng) 選擇BP反應(yīng)測(cè)序成功的質(zhì)粒，進(jìn)行LR反應(yīng)。使用Invitrogen公司LR Clonase Ⅱ enzyme mix介導(dǎo)目的基因從入門(mén)載體的連接到入門(mén)載體。過(guò)表達(dá)載體為pH7WG2D，RNA干擾載體為pK7GWIWG2D，在微量離心管中配制LR反應(yīng)混合液（4 μL體系）：1 μL 入門(mén)克?。?0～150 ng），1 μL 目的載體 （150 mg?L-1），1 μL LR Clonase Ⅱ enzyme mix，1 μL ddH2O。25 ℃水浴12 h，加入1 μL proteinase K solution，37 ℃水浴5 min，終止LR反應(yīng)。將LR連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)入DH5α，LB平板（壯觀霉素，Spe抗性）培養(yǎng)過(guò)夜，篩選菌落并菌液PCR驗(yàn)證。1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)并測(cè)序。

載體構(gòu)建的流程見(jiàn)圖1。

圖1 載體構(gòu)建流程圖

Fig.1 Flow chart of vector construction

3 結(jié)果

3.1 引物合成

依據(jù)NCBI提供的新疆紫草PAL，HMGR，PGT的cDNA序列，設(shè)計(jì)并合成目的基因過(guò)表達(dá)載體和RNA干擾載體構(gòu)建所需cDNA擴(kuò)增特異性引物，見(jiàn)表1。

3.2 T載體克隆

將已純化的過(guò)表達(dá)和RNAi基因PCR產(chǎn)物與pGEM-T Easy Vector連接，并將產(chǎn)物轉(zhuǎn)入DH5α進(jìn)行菌液培養(yǎng)，菌液PCR獲得目的基因的T載體質(zhì)粒，見(jiàn)圖2。

表1 PAL，HMGR，PGT擴(kuò)增特異性引物

Table 1 Primers of PAL， HMGR， PGT for overexpression （upper） and RNAi （lower）

引物名稱(chēng) 序列（5′-3′）堿基數(shù)片段長(zhǎng)度/bp

過(guò)表達(dá)載體PAL-FTGCTAATACTTCCACACG182 386

PAL-RGAGAACAAAAAGAAATAG18

HMGR-FTGAAACAATCATCACTTAC192 013

HMGR-RTTTATCAATGAGGTGGAC18

PGT-FTAAACATCCCAAACTAAAG191 203

PGT-RAACAAATTTTGATAATGC18

PAL-F-CACCCACCTGCTAATACTTCCACACG222 386

PAL-R-CACCCACCGAGAACAAAAAGAAATAG22

HMGR-F-CACCCACCTGAAACAATCATCACTTAC232 013

HMGR-R-CACCCACCTTTATCAATGAGGTGGAC22

PGT-F-CACCCACCTAAACATCCCAAACTAAAG231 203

PGT-R-CACCCACCAACAAATTTTGATAATGC22

RNA干擾載體PAL-FTGAGTCAATGAAGGGTAGC19490

PAL-RGAGGGGTAGGAATGGAGTAA20

HMGR-FCTCGGTTCCTATGGCTAC18525

HMGR-RCAGGAGCACATCGTCTTG18

PGT-FATTTGGATGGTGGGCAGTT19328

PGT-RTAAAGCGGGTAGGCGATA18

PAL-F-CACCCACCTGAGTCAATGAAGGGTAGC23490

PAL-R-CACCCACCGAGGGGTAGGAATGGAGTAA24

HMGR-F-CACCCACCCTCGGTTCCTATGGCTAC22525

HMGR-R-CACCCACCCAGGAGCACATCGTCTTG22

PGT-F-CACCCACCATTTGGATGGTGGGCAGTT23328

PGT-R-CACCCACCTAAAGCGGGTAGGCGATA22

1.PAL質(zhì)粒DNA;2.空載質(zhì)粒DNA;M.2 kb DNA Ladder（圖3～5同）。

圖2 過(guò)表達(dá)（上）和RNAi（下）基因的T載體克隆PCR凝膠電泳

Fig.2 T vectors cloned PCR gel electrophoresis of overexpression（upper） and RNAi（lower） gene

3.3 過(guò)表達(dá)和RNA干擾載體的構(gòu)建

3.3.1 高保真PCR 以構(gòu)建好的pGEM-T質(zhì)粒為模板，使用加有CACC的特異性引物，用高保真酶Phusion High-fidelity進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得過(guò)表達(dá)基因全長(zhǎng)和RNA干擾基因片段，PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化后，進(jìn)行下一步的BP反應(yīng)，見(jiàn)圖3。

圖3 過(guò)表達(dá)（上）和RNAi（下）基因高保真PCR凝膠電泳

Fig.3 High-fidelity PCR gel electrophoresis of overexpression（upper） and RNAi（lower） gene

3.3.2 BP連接反應(yīng) 獲得目的片段后進(jìn)行BP反應(yīng)，產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5α，在Kan抗性的LB培養(yǎng)皿37 ℃培養(yǎng)過(guò)夜，挑取單克隆，做菌液PCR鑒定，見(jiàn)圖4。提取測(cè)序正確樣品的質(zhì)粒進(jìn)行的LR反應(yīng)。

圖4 過(guò)表達(dá)（上）和RNAi（下）基因BP反應(yīng)凝膠電泳

Fig.4 BP reactions PCR gel electrophoresis of overexpression（upper） and RNAi（lower） gene

3.3.3 LR連接反應(yīng) BP反應(yīng)的產(chǎn)物經(jīng)過(guò)LR反應(yīng)，分別將目的基因克隆到過(guò)表達(dá)載體pH7WG2D和干擾載體pK7GWIWG2D上，轉(zhuǎn)化DH5α，在Spe抗性的LB培養(yǎng)皿37 ℃培養(yǎng)過(guò)夜，挑取單克隆，做菌液PCR鑒定，見(jiàn)圖5。測(cè)序結(jié)果顯示與目的基因的序列一致，說(shuō)明新疆紫草次生代謝關(guān)鍵基因PAL，HMGR，PGT的過(guò)表達(dá)和RNAi載體構(gòu)建成功。

圖5 過(guò)表達(dá)（上）和RNAi（下）基因LR反應(yīng)凝膠電泳

Fig.5 LR reactions PCR gel electrophoresis of overexpression （upper） and RNAi （lower） gene

本研究從NCBI獲得新疆紫草PAL，HMGR，PGT基因，使用Primer Premier 5分別設(shè)計(jì)了過(guò)表達(dá)和RNA干擾引物，和對(duì)應(yīng)含CACC接頭的引物，并以新疆紫草cDNA為模版PCR克隆得到過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建所需的全長(zhǎng)基因（長(zhǎng)度依次為2 086，2 013，1 023 bp）和RNA干擾所需的基因片段（長(zhǎng)度依次為490，525，328 bp）。PCR產(chǎn)物經(jīng)過(guò)純化后連接在pGEM-T EasyVector后使用高保真酶Phusion High-fidelity做PCR，并將產(chǎn)物轉(zhuǎn)入了GATEWAY載體構(gòu)建技術(shù)的BP反應(yīng)入門(mén)載體pENTRTM SD/D-TOPO Vector，在卡那霉素抗性篩選后將新疆紫草PAL，HMGR，PGT基因的全長(zhǎng)轉(zhuǎn)入過(guò)表達(dá)載體pH7WG2D，并將目的基因的編碼區(qū)片段轉(zhuǎn)入RNA干擾載體pK7GWIWG2D，經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證基因無(wú)變異。

4 結(jié)論

本研究采用本實(shí)驗(yàn)室研究較為成熟的pH7WG2D，pK7GWIWG2D載體，使用GATEWAY載體構(gòu)建技術(shù)分別成功構(gòu)建了新疆紫草PAL，HMGR，PGT基因過(guò)表達(dá)和RNA干擾載體，對(duì)于新疆紫草基因功能驗(yàn)證和遺傳轉(zhuǎn)化的平臺(tái)建立起到了關(guān)鍵作用。

植物的代謝無(wú)時(shí)無(wú)刻不受到基因的調(diào)控，次生代謝物發(fā)生變化，意味著指導(dǎo)其生物合成的代謝通路有所異動(dòng)，這種異動(dòng)往往是由于代謝通路上某一個(gè)或一類(lèi)關(guān)鍵酶基因的表達(dá)發(fā)生了變化，所以可以人為改變某特定基因的表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)下游次生代謝，進(jìn)而控制目標(biāo)代謝產(chǎn)物的合成。而這種基因表達(dá)的改變，莫過(guò)于上調(diào)或下調(diào)其表達(dá)量，基因的過(guò)表達(dá)技術(shù)對(duì)應(yīng)著前者，RNA干擾則與后者對(duì)應(yīng)。

目的基因與一個(gè)強(qiáng)啟動(dòng)子連接后，在載體的介導(dǎo)下轉(zhuǎn)入植物體，使得目的基因在整個(gè)生命過(guò)程中都有表達(dá)，即實(shí)現(xiàn)過(guò)表達(dá)，這對(duì)于基因功能的研究有重要意義[12-19]。例如，將新疆雪蓮查爾酮異構(gòu)酶基因在煙草中的過(guò)表達(dá)，會(huì)使得煙草大量積累黃酮類(lèi)化合物，總黃酮量能達(dá)到對(duì)照組的6倍[20]?；虻倪^(guò)表達(dá)在對(duì)次生代謝進(jìn)行調(diào)控的同時(shí)會(huì)改變植物的抗性，對(duì)于新品種的選育和開(kāi)發(fā)有重要意義[21-22]。例如，崔道雷等的研究表明，過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子對(duì)煙草中過(guò)表達(dá)云南紅梨的PybHLH基因，會(huì)顯著提高煙草的耐鹽性[23]。

RNAi形成的機(jī)制在于雙鏈RNA被降解為21～25 bp的siRNA（small interference RNA）并與特異蛋白結(jié)合為siRNA誘導(dǎo)干擾復(fù)合體，該復(fù)合體通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)識(shí)別并降解與之高度保守的同源mRNA，從而達(dá)到基因缺失的目的[24-25]，反過(guò)來(lái)就是通過(guò)研究RNAi干擾后植物所呈現(xiàn)的功能或表型的改變可以判斷擾基因的功能。例如，在宋婕的研究中，SmPAL1基因干擾的株系中咖啡酸的含量明顯低于對(duì)照組，丹酚酸B的含量卻有所提高，同時(shí)研究還發(fā)現(xiàn)RNAi植株中木質(zhì)素的含量也會(huì)有所降低，由此可以認(rèn)為SmPAL1基因會(huì)促進(jìn)咖啡酸和木質(zhì)素的合成[26]。RNA干擾除了可以調(diào)控植物次生代謝和驗(yàn)證基因功能外[27-33]，同樣可以用于抗性植物的培育[34]。

由于新疆紫草分布區(qū)域狹窄，新疆紫草野生種群處于瀕危狀態(tài)，屬于國(guó)家國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)野生植物[35]。生物工程培養(yǎng)新疆紫草獲取次生代謝產(chǎn)物[36]是目前滿足日益龐大的紫草素類(lèi)化合物的工業(yè)和社會(huì)需求的主要手段[37]，也是新疆紫草目前研究的熱點(diǎn)[7-8]。過(guò)表達(dá)和RNAi載體的構(gòu)建，是進(jìn)一步構(gòu)建過(guò)表達(dá)株系或RNA干擾株系的先決條件。搭建基于過(guò)表達(dá)和RNA干擾的遺傳研究平臺(tái)是新疆紫草次生代謝物生物合成研究的不可或缺的部分。

本研究通過(guò)GATEWAY技術(shù)成功構(gòu)建了新疆紫草次生代謝關(guān)鍵基因PAL，HMGR，PGT的過(guò)表達(dá)載體和RNAi載體，同時(shí)提供了一套系統(tǒng)的載體構(gòu)建方法，對(duì)于搭建新疆紫草功能基因挖掘和驗(yàn)證的遺傳研究平臺(tái)，和PAL，HMGR，PGT過(guò)表達(dá)株系和RNAi株系的構(gòu)建奠定了基礎(chǔ)，也填補(bǔ)了新疆紫草在該領(lǐng)域研究的空白，并為中藥次生代謝機(jī)制的研究提供了豐富的理論支持。

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Overexpression and RNAi vectors built for key secondary metabolic

pathway genes PAL， HMGR， PGT of Arnebia euchroma

XIE Teng1，2， LIU Yu-zhong2， WANG Sheng2， LIU Tan2， KANG Li-ping2， GUO Lan-ping2*

（1. School of Life Science and Engineering， Southwest Jiaotong University， Chengdu 610031， China;

2. State Key Laboratory of Dao-di Herbs， National Resource Center of Chinese Materia Medica，

China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100700， China）

[Abstract] Arnebia euchroma is the main source for medicinal herb Zicao. and its most important component shikonin compounds have high medicinal and industrial value. This research is aimed to build overexpression vectors and RNAi vectors for key secondary metabolism genes of A. euchroma， and bulid platform for constructions of related transgenic lines using GATEWAY technology. To build genetic material based genetic research platform is to provide a great convenience for digging and functional verification of the genes on secondary metabolic pathway， and also to fill the gaps in transgenic research of A. euchroma. This study is also important for the cultivation of shikonin high-yielding strains of A. euchroma.