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【關(guān)鍵詞】雙語幼兒園；英語教師；師資
英語的重要性在當今社會中是日益在增加，目前在中國不只是大學，同時小學都是相當重視英語教育的。因此，英語的培訓機構(gòu)也如雨后春筍一般不斷的出現(xiàn)在人們的視野中。為了緊跟時代的節(jié)奏，雙語幼兒園也應運而生。雙語幼兒園的出現(xiàn)就讓孩子的英語可以從小時候就抓起了，但是目前英語教師的質(zhì)量和水平卻實在是令人堪憂，因此，幼兒英語教師應該要不斷的提高自身的職業(yè)素質(zhì)。
1 幼兒英語教師合格的標準
實踐證明，作為一名合格的幼兒英語教師需要具備多方面的條件。首先，扎實的語言基礎(chǔ)是必須的，這是作為一名幼兒英語教師的最基本的要求，其中主要包括語音、詞匯和語法，同時還應該有熟練的聽說讀寫的能力；其次，目前也正提倡著德智體美勞的全面發(fā)展，應該除了具備扎實的基礎(chǔ)知識之外，幼兒英語老師還得能夠?qū)⒊?、跳、繪畫以及制作等運用到課堂中去，同時，在教授的過程中也應該要熟練的掌握好幾種不同的教學方法；最后，在教學過程中最缺少不了的就是感染力，要是老師在教授過程中具有充分的感染力，那么學生們自然會很快的融入進去，這樣就有助于提高教學質(zhì)量。
2 目前幼兒英語教師培養(yǎng)存在的問題
盡管雙語幼兒園已經(jīng)在中國出現(xiàn)很多年了，但是最終培養(yǎng)出來的學生的素質(zhì)并不高，那么主要的問題出現(xiàn)在哪里呢？經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，其存在的問題主要是生源、師資以及教材設(shè)置這幾方面。
2.1 生源問題
幼兒的模仿能力是很強的，可以說在幼兒園的學習過程中，學生學習的過程其實就是對老師的模仿過程。因此，在英語學習過程中，幼兒的習得英語的過程也就是對老師的模仿過程。但是，由于目前盡管英語的重要性一再被強調(diào)，但是最終很多幼教根本就是不符合標準的，暫且不談專業(yè)知識，他們所學的、所教授的方式一般情況下都只是很適用于初高中學生，所以適合幼兒的教授方法是很欠缺的。另外，由于幼教對老師的學歷要求并不高，因此很多老師的學歷相對于來說就很低了，這樣就會導致老師們根本不懂得如何將自己所需到的知識運用到實際中去，因此，在授課過程中就可能會出現(xiàn)思維混亂、說服力不強、找不到重點等問題。所以，目前盡管老師很多，生源充足，但是大部分都是不合格的。
2.2 師資問題
師資隊伍的水平直接決定著幼兒英語教育的水平，加強師資隊伍水平的建設(shè)是提高學校教學質(zhì)量的重要條件。盡管有了明確的教學內(nèi)容以及有效的教學方法，如果沒有一個合格的老師來進行實踐，那么最終理論也是無法在實際中實踐出來的，最終也只是紙上談兵。目前國內(nèi)的幼兒英語教育老師師資力量還是不夠強大的，首先就是現(xiàn)在老師普遍偏老年化，年輕的老師在整個師資隊伍中所占的比例不高，還是主要是以年老的老師為主，但是學科中的骨干力量卻并不多；其次，老師的綜合素質(zhì)還有待提高，很多老師都缺乏創(chuàng)新能力以及創(chuàng)造力和豐富的想象力，同時德才兼?zhèn)涞睦蠋熞脖容^少，一般的老師在文娛方面的能力都比較缺少；最后，那種專業(yè)能力和實踐能力都兼?zhèn)涞睦蠋煴容^少，老師職業(yè)素質(zhì)不高。
2.3 教材問題
在教學過程中，教材是基本的工具，是在幼兒英語教育中不可或缺的一部分。但目前在幼兒的教材選擇上也存在著很大的問題，主要表現(xiàn)在以下幾個方面：首先，教材在選擇的過程中出現(xiàn)了多、亂、雜的問題，現(xiàn)在不同地區(qū)的教材都不同，可供選擇的教材很多，但是所有的教材都沒有一個統(tǒng)一的標準，很雜亂，因此在教材的選擇過程中盡管數(shù)量多，但是卻不知道該如何選擇才是最好的，不知道哪本教材才是最適合孩子們的；其次，教材并沒有系統(tǒng)的從聽、說、讀、寫這幾個方面來進行編排，在教材的編排過程中不注意四者的平衡，同時教材中的插圖少、且大多數(shù)也不符合小孩子的心理；最后，教材的難易程度也沒有充分的考慮孩子的接受能力，教材是普遍偏難的。
3 師資的培養(yǎng)方法
通過調(diào)查研究，我們已經(jīng)清楚的了解到了雙語幼兒園教學質(zhì)量不高的原因了，其最主要的問題還是出現(xiàn)在師資隊伍建設(shè)這一塊，因此，加強師資隊伍建設(shè)是必須的。
3.1 提高幼教的專業(yè)技能
加強幼教的專業(yè)技能的培養(yǎng)是提高幼教的素質(zhì)的重要方法之一。對其的培養(yǎng)主要可以從這幾個方面來進行：首先校方可以專門聘請優(yōu)秀的幼教或者是專家來對老師們進行職業(yè)技能的訓練，讓其能獲得更多更好的經(jīng)驗；其次可以將幼師們組織起來進行經(jīng)驗交流，可以從教學方法和教學技巧等方面一起研討，找出最適合孩子們學習的方法，同時要鼓勵創(chuàng)新，培養(yǎng)有創(chuàng)新能力和有創(chuàng)造能力的老師；同時，也可以將非幼教專業(yè)的老師進行一個有針對性的培養(yǎng)，讓其可以能輕松自如的在教學過程中將英語技能和幼教技巧結(jié)合起來，靈活自如的運用。
3.2 規(guī)范學歷要求
由于目前對幼教的學歷要求很低，因此就造成了大部分的幼教的學歷并不高的局面，所以由于其實踐能力不強，相應的在教學過程中就會出現(xiàn)思維混亂、針對性不強等問題，這對于幼兒的教育是非常不利的。所以，如果想要加強雙語幼兒園的教學水平的提高，那么就必須對幼教的學歷有一個嚴格的要求，這樣才能提高幼教的整體素質(zhì)，才能確保其在授課過程中的條理性以及針對性。
3.3 加強與外界的交流
要想提高自身的能力，除了自我不斷的進行充電外，加強與外界的交流這一點也是最不能忽視。“三人行，必有我?guī)熝伞保嗯c他人進行交流是一個加強自身素質(zhì)和水平提高的一個重要的途徑。通過與他人進行交流，與其他的雙語幼兒園的幼教進行交流，就可以多多學習和借鑒他人的比較好的經(jīng)驗，同時通過交流也能夠認識到自己的缺點和不足，及時的發(fā)現(xiàn)自身的問題就能及時的解決，這樣就更能提高自身素質(zhì)提高的速度了。另外，通過相互之間的交流也有助于國內(nèi)雙語幼兒園教學水平的整體提高。
【參考文獻】
[1]王海燕.淺談幼兒英語學習[J].科技創(chuàng)新導報，2009（32）.
在我看來，南南的這個缺點，是心情浮躁、注意力不集中的表現(xiàn)。這可能是受到了環(huán)境的影響，也可能是先天比較好動，但無論是什么原因，孩子既然進入了集體生活，就應該提高自制力，適應集體的規(guī)則，在上學前解決注意力不集中這個問題。
一天，我在給南南準備晚間故事的時候，忽然翻到了一個小故事。這個故事讓我眼前一亮，也許，我可以從中借鑒到一個好方法。
有一個國王，丟了一塊珍貴的懷表，他下令，誰找到了這塊懷表，就給誰幾箱金子作為獎勵。大家為了獎勵，全都出動去找這塊懷表。人們找啊找啊，整整一天都毫無所獲。天黑了，大家又累又餓，便回去休息，準備第二天再找。這時，只有一個小男孩沒有隨著人們回去，仍然在各個角落繼續(xù)尋找。天黑了，人們進入了夢鄉(xiāng)，四處靜悄悄的，甚至連蟲子發(fā)出的極細聲音都能聽到。這時候，從一個角落里傳來了鐘表走動的嘀嗒聲。男孩向著聲音發(fā)出的地方走過去，果然找到了國王的懷表！
我把這個故事講給了南南聽，南南十分喜歡，接連幾天晚上，都要求聽這個故事。我趁熱打鐵，對南南說：“我們也來做個游戲，媽媽扮國王，丟了懷表，你幫媽媽找出這個懷表，媽媽給你獎勵，好嗎？”
南南高興地問：“是什么獎勵呢？”
我笑著說：“等你找到了懷表，自然就知道了?！?/p>
因為有了神秘的獎勵，南南更加感興趣了。于是他和我一起演起了情景劇。我把一個小鬧鐘放在房間的一個角落里，把燈全部關(guān)掉，南南就和故事里的小男孩一樣，憑著細小的嘀嗒聲去找那個鬧鐘。
一開始，南南完成得并不順利，他沒有控制自己的動作，在找鐘的過程中發(fā)出了很多的噪聲：腳步的咚咚聲、變換姿勢的碰撞聲和情不自禁的說話聲。這些聲音干擾了他，使他聽不到嘀嗒聲。
南南經(jīng)過幾次的尋找，也發(fā)現(xiàn)了原因。于是，他開始有意地放輕腳步，舒緩呼吸，變換姿勢時盡量放輕動作，避免碰撞，并忍住了說話的欲望，專心地捕捉細微的指針走動聲。終于，南南成功地找到了鬧鐘，他非常高興，我也欣喜異常，兌現(xiàn)了獎勵他一套兒童繪本的許諾，由于是通過游戲贏取的獎勵，南南特別有成就感。
接下來的一段時間里，我又抓住機會進行了幾次這樣的游戲，南南吸取了之前的經(jīng)驗，盡量安靜地尋找，結(jié)果找到鬧鐘的時間越來越短。在靜謐黑暗的環(huán)境中，他體會到，原來只要屏息凝神，聽覺感官會變得更加靈敏，也更能發(fā)現(xiàn)一個不一樣的世界。
【關(guān)鍵詞】采油設(shè)備;毛辮子;磨損;使用周期
0.前言
抽油機毛辮子作為連接驢頭和光桿的部件，在設(shè)備運轉(zhuǎn)過程中起到了很重要的作用。由于油井的生產(chǎn)情況不斷變化，毛辮子在使用中經(jīng)常受到交變載荷的拉伸作用，產(chǎn)生疲勞損壞。另外設(shè)備在野外運轉(zhuǎn)，毛辮子受到腐蝕、銹蝕、磨損等不利因素的影響，強度會大大降低，在交變載荷的作用下，就會出現(xiàn)斷股現(xiàn)象，進而導致毛辮子在設(shè)備運轉(zhuǎn)中斷，造成停井，出現(xiàn)設(shè)備事故。因此，加強對毛辮子的保養(yǎng)就顯得尤為重要。
1.毛辮子現(xiàn)狀調(diào)查及保養(yǎng)中存在的問題
1.1現(xiàn)狀調(diào)查
抽油機毛辮子是由麻芯和鋼絲繩構(gòu)成，麻芯浸滿機油，在鋼絲繩張力作用下，繩芯的機油沿鋼絲繩一點點外滲，附著在毛辮子表面。抽油機在更換毛辮子作業(yè)中，要求在毛辮子表面均勻涂抹黃油，黃油也具有附著毛辮子表面防銹保濕的作用。根據(jù)機油貯存方面的資料表明:密封良好的機油保質(zhì)期為1～2年，假定我們認定毛辮子是一個密封結(jié)構(gòu)，那么油芯的使用壽命最多也就是兩年，黃油暴露在空氣中不到一個月時間已經(jīng)發(fā)黑，生產(chǎn)廠家對毛辮子使用保質(zhì)期為半年。在一保作業(yè)過程中要求檢查抽油機毛辮子，對有起刺斷股現(xiàn)象的毛辮子要求更換。
我們對結(jié)構(gòu)鋼絲繩突然斷裂樣品進行拆繩拆股，發(fā)現(xiàn)鋼絲繩外股斷絲近44%，內(nèi)部嚴重銹蝕，股間積留粉塵。分析結(jié)果表明：組繩外股之間缺少導致大量斷絲是鋼絲繩使用中突然斷裂的直接原因；鋼絲繩制造過程工藝不當、油脂質(zhì)量不良及后續(xù)維護方式不當、時機把握不好、未使用專門維護油脂是造成鋼絲繩斷裂的主要原因。
1.2保養(yǎng)中存在的問題
現(xiàn)場為防止出現(xiàn)毛辮子斷事故，延長使用壽命，一般采用人工涂抹黃油進行保養(yǎng)的方法，但黃油不具有滲透性，只能保養(yǎng)毛辮子表面，內(nèi)部得不到保養(yǎng)，而且保質(zhì)期很短，容易受風化作用變質(zhì)風干，起不到根本的保養(yǎng)作用，還存在停井時間長、安全隱患大等缺點。
2.毛辮子保養(yǎng)器的研制應用
針對現(xiàn)場生產(chǎn)中存在的這種情況，經(jīng)過兩個多月的實驗論證，研制出了毛辮子保養(yǎng)裝置。該裝置由：油儲罐、單流閥、柱塞、液壓缸、膠管、噴頭組成。
應用時只需將該裝置安裝在抽油機游梁下面的支架上，利用游梁下行時對液壓缸柱塞的下壓力將油擠出，上行時利用彈簧的頂力將柱塞頂起，油盒內(nèi)的油進入液壓缸。油通過噴油頭噴到毛辮子上，利用油的滲透性，對毛辮子進行全面防腐保養(yǎng)。
3.現(xiàn)場應用效果分析
此裝置的應用，有效的解決了現(xiàn)場保養(yǎng)毛辮子存在的安全隱患及保養(yǎng)不充分、停井時間長的缺點。大大延長了毛辮子的使用壽命，縮短了停井時間，減少了發(fā)生設(shè)備事故的幾率。
取得的經(jīng)濟效益：
（1）由于應用此裝置保養(yǎng)充分，毛辮子使用壽命平均可延長2年，每口井每年可節(jié)約材料費600元/井。
（2）現(xiàn)場進行保養(yǎng)一次毛辮子需要1小時，應用此裝置不需要停井，隨時可以保養(yǎng)，按油井產(chǎn)量為5噸/天，可多產(chǎn)5/24=0.2083噸原油，每噸按5000元計算，每年保養(yǎng)四次，則可產(chǎn)生0.2083*5000*4=4166元的效益。
（3）最重要的是消除了常規(guī)保養(yǎng)存在的安全隱患，避免了人身和設(shè)備損害。
總的說來，應用此裝置每口井每年可產(chǎn)生4166+600=4766元甚至更大的經(jīng)濟效益，社會效益顯著。
4.結(jié)論
該裝置在梁西管理區(qū)的油井上安裝使用后，都取得了比較好的效果。自2011年8月使用后至今，管理區(qū)未發(fā)生一起因保養(yǎng)不當造成的毛辮子斷脫事故，有效地解決了目前生產(chǎn)中存在的設(shè)備管理問題，社會效益及經(jīng)濟效益顯著。
（1）有效地延長了毛辮子的使用壽命。
（2）減少了毛辮子斷事故的發(fā)生，提高了油井管理水平。
（3）縮短了停井時間，提高了開井時率，減少了因維修保養(yǎng)而造成的產(chǎn)量損失。
（4）消除了常規(guī)保養(yǎng)存在的安全隱患，避免了人身和設(shè)備損害?！科]
【參考文獻】
［1］張琪主編.采油工程原理與設(shè)計[M].北京：石油大學出版社，2002.
關(guān)鍵詞： 自理能力 家庭差異 幼兒教育
一、問題的提出
幼兒期是培養(yǎng)和訓練幼兒生活自理能力的關(guān)鍵期，老師和家長應該抓住這一關(guān)鍵期，讓幼兒多做些力所能及的事，培養(yǎng)他們簡單的生活自理能力。在教育過程中我們發(fā)現(xiàn)，許多幼兒在幼兒園能夠自己的事情自己做，在家中卻并非如此，存在很多問題。這樣一個“兩面派”的現(xiàn)象引起了筆者的注意。對此，筆者進行了一系列調(diào)查，最終找到了指導家庭培養(yǎng)幼兒自理能力的切入點，采取了有效的家庭指導策略，達到了家園配合共同培養(yǎng)幼兒自理能力的目的。
二、調(diào)查結(jié)果和分析
（一）幼兒在幼兒園與在家生活自理能力的差異狀況。
筆者選取園中兩個小班共60名幼兒，就幼兒一日生活中必須掌握的幾項生活自理能力內(nèi)容，通過問卷、與家長訪談的方式，了解這些幼兒目前在幼兒園及在家中的生活自理能力的狀況，具體顯示如下。
表1 幼兒在園自理能力情況（單位：百分比）
表2 幼兒在家自理能力情況（調(diào)查小班幼兒）
（二）調(diào)查結(jié)果分析。
對比表1、表2的兩個調(diào)查結(jié)果可以看出，首先，幼兒在園自理情況普遍高于在家自理情況。其次，通過調(diào)查發(fā)現(xiàn)，目前大多數(shù)幼兒家長對“幼兒自理能力”已經(jīng)具備了正確的認識，那是什么原因造成具有了正確認識的家長還不能正確培養(yǎng)幼兒的自理能力呢？
三、幼兒自理能力家園表現(xiàn)差異的原因分析
針對上述問題，筆者與家長進行了進一步交談，獲取了資料，歸結(jié)出了這樣幾種可能的原因。
（一）家長對孩子的自理能力缺乏信心與耐心。
其實大部分家長失敗在”怕“上。孩子自己洗臉、刷牙，怕洗不干凈，怕弄得到處都是水。孩子自己動手穿衣服、脫衣服，怕穿得不整齊，怕穿得慢了會著涼……就這樣，怕這，怕那，對“培養(yǎng)幼兒自理能力”的正確認識就被“怕”字給遮住了。
（二）長輩越俎代庖的教養(yǎng)剝奪了孩子的鍛煉機會。
現(xiàn)在家長由于某些原因，把孩子交給長輩照顧。這些長輩由于“隔代親”的影響，對孩子百般寵愛、百般嬌慣，什么事情都不讓孩子動手，以至于孩子的自理能力得不到很好的鍛煉。
（三）孩子的依賴心理造成孩子不會的假象。
在父母長輩一直以來的包辦代替下，孩子的依賴性逐步增強，比較任性而懶惰。他們常常在父母面前撒嬌，而家長最終“戰(zhàn)勝”不了孩子，只好幫助孩子。這樣就會周而復始、惡性循環(huán)。
四、以家庭教育為切入點，增強幼兒自理能力教育效果
經(jīng)過本次調(diào)查與分析，筆者認為現(xiàn)在孩子在家中與在幼兒的自理情況有很大差別，面對這一問題，還需要與家長進行進一步溝通，幫助家長更深一層地認識到“幼兒自理能力”的重要性，指導家長樹立正確的教育觀念，掌握正確有效的教育方法。為此，筆者提出了以下幾點建議：
（一）樹立正確的教育觀，激發(fā)幼兒自理能力的發(fā)展。
良好的家庭教育是幼兒健康成長的必要條件。因此，家長必須樹立正確的教育觀，讓幼兒有一個良好的家庭教育。
（二）抓住任何時機為幼兒提供學習鍛煉的機會。
在家庭中，每當幼兒表現(xiàn)出積極主動的自我意識時，家長就要抓住這些機會，及時地給予孩子支持和引導。如幼兒要自己穿衣服時，家長可用“寶寶的本領(lǐng)真大，會自己做事情了”等語言來鼓勵孩子。這樣，幼兒不僅會高興地做，還能在快樂中掌握正確的穿衣方法。
（三）運用靈活的方法激發(fā)幼兒的學習欲望。
1.榜樣示范法：家長可以利用孩子善于模仿的契機，為孩子樹立良好榜樣。凡是要求孩子做到的，自己首先要做到。
2.積極評價法：當孩子在某方面取得進步或獨立完成某件事情時，家長就要對孩子的行為給予一定的肯定，積極的評價會讓孩子充滿成就感，更有信心做好每件事情。
3.操作指導法：當家長發(fā)現(xiàn)孩子在某些方面不如他人或達不到預期效果時，不要著急，可以通過正確的教育，鼓勵孩子并及時給予指導，讓孩子自己探索、完成，促進孩子自信心、責任感的培養(yǎng)。
（四）家庭成員要保持一致性和一貫性。
1.一致性：在培養(yǎng)孩子自理能力時，家庭人員一定要一致地對孩子進行教育，只有這樣，孩子才會從小養(yǎng)成良好的生活習慣，提高生活自理能力。
2.一貫性：只要家長們堅持一貫性，提供給孩子不斷反復練習的機會，孩子就會更快地掌握技能，更快地形成良好的生活自理能力。
總之，幼兒生活自理能力的培養(yǎng)不是一蹴而就之事，只有家長們堅持不斷地給孩子創(chuàng)造鍛煉的機會，他們的生活自理能力才會得到提高。
參考文獻：
關(guān)鍵詞：人來瘋；學前幼兒；自制力；培養(yǎng)；策略
中圖分類號：G610 文獻標識碼：A 文章編號：1002-7661（2012）09-276-01
“人來瘋”多出現(xiàn)于3-6歲的幼兒。我們知道，幼兒的自制力較差，他們各個心理過程都容易受外界情景的影響，帶有很大的情景性，情感也是如此。幼兒的情感常常是由外界刺激的出現(xiàn)而直接引起，又隨著外界刺激的變化而變化。幼兒往往容易興奮、激動起來，不能抑制。對于孩子的“人來瘋”不能單純依靠“禁止”的方式，而應當把培養(yǎng)孩子的自制力作為關(guān)鍵點來對待。
自制力是指幼兒控制和支配自己的行為的意志品質(zhì)。幼兒期是各項能力和品質(zhì)形成的關(guān)鍵時期，因此，為使幼兒具有堅強的意志，從小培養(yǎng)他們的自制力是非常必要的。那么，我們應該如何培養(yǎng)幼兒自制力呢？我認為應該采取以下幾方面策略：
一、為幼兒建立合理的生活制度。要求兒童按照生活制度進行一天生活著的各項活動，養(yǎng)成良好的有規(guī)律的生活習慣，并堅持在各項活動中的一定的要求。要鼓勵兒童付出一定的努力，控制自己的行為，獨立完成各項任務。要求幼兒要遵守作息制度，做到按時起床、鍛煉，按時結(jié)束游戲，準備上課，按時進餐，就寢，抑制自己諸如睡懶覺、貪玩等不合理的愿望與要求，讓他們必須付出一定的意志努力，從而幫助他們逐漸形成遵守作息制度的良好習慣。在這個過程中，逐漸培養(yǎng)幼兒初步的堅持性、目的性等品質(zhì)。
二、運用適當?shù)挠螒蚺囵B(yǎng)自制力。游戲活動是幼兒最主要的活動，幼兒在游戲中體驗快樂，在快樂的情緒影響下更愿意根據(jù)規(guī)則進行游戲，使幼兒學習控制自己的行為。因此在培養(yǎng)幼兒自控能力的時候，我把游戲這一方法作為首選。根據(jù)幼兒的特點，選擇了一些適合幼兒的游戲。在操作游戲中，對材料的操作和擺弄是激發(fā)幼兒游戲興趣的源泉。如操作拼圖游戲時，我有意識地讓幾個幼兒共同來完成。游戲中孩子學會了等待和輪流游戲，即使是很急噪的幼兒也逐漸能靜下來和同伴一起完成拼圖。組織這樣的游戲活動由于幼兒會專注于手部動作和材料本身，所以在規(guī)則簡單的情況下，幼兒的自控能力表現(xiàn)的比較突出。在角色游戲中，可借助游戲的魅力，讓幼兒在游戲中扮演各種社會角色，承擔責任，從而學習行為規(guī)范和行為準則，學習在游戲中遵守秩序，學會等待、合作，提高幼兒的自我控制能力。游戲中他們要排隊買東西，排隊領(lǐng)錢，和同伴合作游戲，從中也能遵守一些簡單的社會行為規(guī)則。
三、正視幼兒的自我評價。正確的自我評價是幼兒樹立自信心的前提，也是幼兒能夠具備適當自制力的基礎(chǔ)。在日常教育中還應幫助幼兒學會評價自己的行為和別人的行為，從別人對他行為的評價轉(zhuǎn)化為幼兒自己的行為評價。當幼兒能夠遵守有關(guān)行為規(guī)則時，教師也應及時表揚鼓勵。如每一次的講評課，我讓幼兒自己來評價自己的行為和別人的行為，哪些事情應該做的，哪些事情不應該做的，有時孩子們的評價還真能起到一定作用。有了對自己較為客觀、正確的認識，幼兒才能對自我產(chǎn)生認同，了解自己的長處與短處，接受自己的地位與現(xiàn)狀，建立初步的自尊與自愛。如果在受到外界不良刺激影響時，幼兒自然地對自己適當評價，做到心態(tài)的及時調(diào)整，進行自我調(diào)節(jié)、自我激勵，保持心理狀態(tài)的穩(wěn)定性。因此，教師的評價對于幼兒也相當重要，因此教師要做到愛護、尊重每一個幼兒。
【關(guān)鍵詞】 子宮腺肌病； 缺氧誘導因子-1； 免疫組化
【Abstract】 Objective：To explore the clinical significance and expression of Hypoxia inducible factor-1 in adenomyosis.Mehtod：Immunohistochemical method was used to detect the each 60 cases of eutopic and ectopic endometrial tissue with adenomyosis， and the positive rate was compared with that of normal endometrium in 30 cases.Result：The expression of the muscular layer and endometrium of adenomyosis in HIF-1 were greater than that of normal endometrium and muscular layer；expression in ectopic and eutopic endometrium of adenomyosis were respectively 86.67% and 65.00%， compared with normal endometrium of 33.33%，there were statistically significant differences（P
【Key words】 Adenomyosis； Hypoxia inducible factor-1； Immunohistochemical
First-author’s address：People’s Hospital of Yingde City in Guangdong Province，Yingde 513000，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.07.008
子m腺肌病是指子宮內(nèi)膜腺體及其周圍間質(zhì)慢襲進入子宮肌層，進行性生長而產(chǎn)生的病變，發(fā)病機制不清，主要表現(xiàn)為繼發(fā)性進行性加重的痛經(jīng)、月經(jīng)量增多、不孕不育等，已成為危害廣大婦女身心健康的重要婦科疾病，藥物治療以及保守手術(shù)治療效果差，尤其對渴望生育的婦女臨床治療非常棘手。研究認為缺氧誘導因子-1（HIF-1）為缺氧狀態(tài)下可調(diào)控新生血管生成，本研究旨在通過臨床資料分析，免疫組化檢測HIF-1在子宮腺肌病中的表達情況并探討臨床意義，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料 收集本科2012年1月-2015年1月診斷明確的子宮腺肌病患者異位、在位內(nèi)膜組織各60例，年齡40～52歲，平均（46.2±3.1）歲；其中增生期患者38例，分泌期22例；月經(jīng)起始時間、周期異常46例（76.67%）；痛經(jīng)病史54例（90.00%）。同時選取同年份在本科因非子宮腺肌病疾病前來門診或病房行診刮術(shù)的正常子宮內(nèi)膜30例作為對照組，年齡26～58歲，平均（45.7±3.0）歲，刮診術(shù)后內(nèi)膜組織經(jīng)病理診斷考慮為正常子宮內(nèi)膜，月經(jīng)起始時間、周期異常24例（80.00%），痛經(jīng)病史25例（86.67%）?；颊吣挲g、月經(jīng)史、臨床表現(xiàn)等一般資料比較差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。所有病例病理診斷均經(jīng)2名副主任及以上醫(yī)師診斷，一般條件可，無高血壓、糖尿病，無術(shù)前使用激素史。
1.2 方法 手術(shù)室取子宮腺肌病患者的在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜組織，非子宮腺肌病疾病前來門診或病房行診刮術(shù)的正常子宮內(nèi)膜，取材后立即放入4%中性甲醛中固定72 h后脫水包埋，每個組織塊均先進行HE染色，篩選，明確診斷后進行免疫組化染色，參照陰性對照組進行分析。
1.3 主要試劑 包括濃縮型兔抗人HIF-1多克隆抗體，使用稀釋度為1∶50，購自武漢博士德生物工程有限公司，通用型二抗購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，用公司提供陽性玻片作為對照組，采用通用免疫組化進行實驗。
1.4 判定標準 參照Birner等[1]展示，在低倍鏡視野下隨機觀察5個視野數(shù)的共計1000個細胞，綜合染色強度和陽性內(nèi)膜細胞總數(shù)占總內(nèi)膜細胞數(shù)的百分比進行處理，HIF-1蛋白表達定位于膜細胞的胞質(zhì)內(nèi)，呈現(xiàn)出棕黃色或棕褐色的顆粒表現(xiàn)。此外，染色強度按以下標準評估：著色弱，但強于對照者為1分，稍清晰者為2分，強者為3分；陽性細胞占總內(nèi)膜細胞數(shù)≤10%者為（-），計0分，10%～50%者為2分，51%～ 80%者為3分，大于80%者為4分。上述兩項評分相加，3分為弱陽性（+），4～5分為陽性，6～7分為強陽性。
1.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理，計量資料采用（x±s）表示，比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用 字2檢驗，以P
2 結(jié)果
2.1 免疫組化結(jié)果 正常子宮肌層與正常子宮內(nèi)膜表達沒有區(qū)別，子宮腺肌病肌層、內(nèi)膜和正常子宮肌層、內(nèi)膜表達比較均有區(qū)別，腺肌病表達均大于正常子宮，見圖1。
2.2 HIF-1在患者異位、在位內(nèi)膜和正常子宮內(nèi)膜中的表達 HIF-1在子宮腺肌病患者的異位、在位內(nèi)膜和正常子宮內(nèi)膜中的表達情況可見，異位和在位內(nèi)膜中的表達為86.67%和65.00%，相比正常子宮內(nèi)膜的33.33%，差異均有統(tǒng)計學意義（P
3 討論
目前，關(guān)于子宮腺肌病該病發(fā)生發(fā)展變化原因與機制不明，有學者認為，子宮肌層內(nèi)的各種細胞因子、免疫因子、激素及其受體、酶及酶的抑制劑等，對其發(fā)生與發(fā)展均起著重要的作用[2]。當前，對于該病的治療包括曼月樂（左炔諾孕酮宮內(nèi)緩釋系統(tǒng)）、子宮動脈栓塞或阻斷治療、腹腔鏡聯(lián)合促性腺釋放激素激動劑（GnRH-a）和放置左炔諾孕酮宮內(nèi)緩釋系統(tǒng)（LNG-IUS）、芳香化酶抑制劑等治療方法，但對于其與缺氧誘導因子之間的關(guān)系的研究并未見[2-11]。有學者認為子宮動脈栓塞治療該病痛經(jīng)的有效率為77.2%[12]，同時，高強度聚焦超聲消融治療能改善有生育要求的子宮腺肌病患者的臨床癥狀，且不增加妊娠及分娩時并發(fā)癥的發(fā)生率[13]，聯(lián)合GnRH-α和/或LNG-IUS能提高高度聚焦超聲消融治療子宮腺肌病痛經(jīng)的療效，降低復發(fā)率[14]。
1991年研究者在探討缺氧誘導的紅細胞成素（EPO）基因表達譜中首先發(fā)現(xiàn)的一種DNA結(jié)合蛋白，命名為缺氧誘導因子-1（HIF-1），進一步研究發(fā)現(xiàn)，其可調(diào)節(jié)細胞內(nèi)氧代謝，起到關(guān)鍵因子的作用。研究發(fā)現(xiàn)HIF-1的靶基因多達40種[15]，其功能主要涉及血管的生成、塑型，轉(zhuǎn)化，促使紅細胞生成、糖轉(zhuǎn)運分解、離子轉(zhuǎn)運、細胞增殖和細胞存活等重要作用[16]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，HIF-1在缺氧狀態(tài)下可調(diào)控血管生成，通過影響血管生存其他因子的表達，包括血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）及其受體-1、內(nèi)皮素-1、誘導型一氧化氮合酶、人內(nèi)皮細胞環(huán)氧合酶-2等因子，而直接或間接參與血管生成的全過程[17]。文獻[18]報道提示上述血管生成因子與子宮腺肌病發(fā)病相關(guān)。
本文通過免疫組化分析，研究結(jié)果提示，正常子宮肌層與正常子宮內(nèi)膜在HIF-1的表達沒有區(qū)別；子宮腺肌病肌層、內(nèi)膜和正常子宮肌層、內(nèi)膜表達比較均有區(qū)別，腺肌病表達均大于正常子宮。同時，統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，異位和在位內(nèi)膜中的表達為86.67%和65.00%，相比正常子宮內(nèi)膜33.33%，差異均有統(tǒng)計學意義（P
從免疫組化分析中可見，具體的細胞組織中，內(nèi)膜細胞中可見表達增強，而在間質(zhì)細胞中幾乎未見表達，表明HIF-1的激活可能與子宮腺肌病的發(fā)病關(guān)系密切，異位和在位的內(nèi)膜相對處于缺氧狀態(tài)，從而誘導細胞過度表達缺氧誘導因子，促進對靶基因的表達，導致細胞對缺氧的耐受能力增強，引起表達進一步增強。同時，在子宮膜異位癥中，HIF-1α在異位內(nèi)膜過度表達，且與異位內(nèi)膜的血管生成密切相關(guān)，推測HIF-1α可能在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機制中起著重要作用[19]。有關(guān)學者認為，HIF-1蛋白的表達科導致大量的VEGF產(chǎn)生，從而促使微血管的生成，間接表明缺氧誘導因子在子宮腺肌病中的重要地位[20]。諸多學者也認為，子宮腺肌病動物模型中，通過甲氧雌二醇-2，可抑制HIF-1蛋白的表達，從而抑制疾病的生長和發(fā)展[21]。筆者的臨床資料分析認為，通過手術(shù)切除子宮或其他的治療方案治療子宮腺肌病，可有效治療該病，但是否可通過抑制缺氧誘導因子，抑制血管內(nèi)皮生長因子的表達，抑制微血管生成，從而治療子宮腺肌病，需做進一步的研究，筆者認為HIF-1也參與子宮腺肌病的血管生成，可能是血管生成的核心調(diào)控因子之一。
綜上所述，子宮腺肌病的發(fā)生、發(fā)展是由多因素、多步驟、多階段構(gòu)成的復雜過程，可能涉及多個細胞因子及基因的激活或抑制。筆者認為，HIF-1與子宮腺肌病發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，促進子宮腺肌病細胞的生長、血管形成。
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保險公司正在養(yǎng)老產(chǎn)業(yè)跑馬圈地。近年來，不斷有保險公司通過建設(shè)養(yǎng)老社區(qū)的方式，對接養(yǎng)老保險，以期進一步擴大公司的養(yǎng)老業(yè)務。
截至2015年二季度末，保險業(yè)共有9家保險公司已投資或計劃投資25個保險養(yǎng)老社區(qū)項目，計劃投資金額612億元。如果截止到最新日期，投入的金額已達到上千億元。
泰康人壽、合眾人壽兩家保險公司均在全國范圍內(nèi)展開了養(yǎng)老社區(qū)的布局，泰康人壽選擇北上廣等一線城市進行開發(fā)，而合眾人壽則偏好沈陽、南寧等二三線城市。
中國人壽、新華保險等保險公司也紛紛涉足這一領(lǐng)域，與養(yǎng)老社區(qū)掛鉤的新型養(yǎng)老保險產(chǎn)品正處于申報過程中。
與其他社會機構(gòu)相比，保險公司投資建設(shè)養(yǎng)老社區(qū)優(yōu)勢十分明顯，首先是在客戶導入上有所優(yōu)勢，保險公司可以根據(jù)保單來鎖定客戶；其次由于在客戶管理方面有數(shù)據(jù)優(yōu)勢，因此在定位定價方面也較為準確，利于良性發(fā)展。
不過，值得記者注意的是，養(yǎng)老社區(qū)屬于重資產(chǎn)，回報時間較長，對于一家以盈利為導向的公司來說，盈利壓力一直懸在頭頂。投入數(shù)百億元何時能盈利？如何盈利？這些都成為保險公司發(fā)展養(yǎng)老社區(qū)的障礙。
泰康人壽專注高端社區(qū)
在眾多保險公司中，泰康在養(yǎng)老社區(qū)的投入已經(jīng)有10年的時間，泰康之家的養(yǎng)老社區(qū)主要采取醫(yī)養(yǎng)結(jié)合的模式，為社區(qū)居民及周邊社區(qū)提供醫(yī)療服務，形成預防―治療―康復―護理的一站式閉環(huán)式。
《投資者報》記者近日通過泰康之家的客服中心了解到，要想入住泰康之家，主要有兩種方法，一種是購買泰康人壽幸福有約系列的保險產(chǎn)品，同一投保人的投保金額必須超過200萬元，才能獲得入住泰康之家的資格。另一種方法則是花費20萬元押金再加上購買65萬元～200萬元的樂泰卡即可入住。入住后每位老人每個月還需要繳納5000元～15000元不等的月費，此外，一些醫(yī)療服務也需要額外收費。
合眾、新華多家加緊布局
與泰康之家有所不同，合眾人壽開發(fā)的合眾優(yōu)年生活養(yǎng)老社區(qū)價位稍低，購買50萬元到75萬元的保險就享有入住資格。定位于中高端人群。合眾人壽相關(guān)人士對《投資者報》記者表示，目前武漢、南寧、沈陽三個地區(qū)的養(yǎng)老社區(qū)已投入運營。
近年來，合眾人壽不斷擴大養(yǎng)老社區(qū)的版圖，甚至延伸到國外，據(jù)合眾人壽方面介紹，2015年至今，公司已花費1.5億美元收購了美國的15家養(yǎng)老社區(qū)。
據(jù)合眾人壽提供給《投資者報》記者的最新數(shù)據(jù)顯示，截至2016年9月，合眾養(yǎng)老社區(qū)對接產(chǎn)品的保費收入達36.7億，占總保費收入的22%，可謂十分可觀。
除泰康人壽、合眾人壽外，新華保險也在加緊養(yǎng)老社區(qū)的布局，在2015年年報業(yè)績會上，新華保險董事長萬峰表示，“目前新華投資的養(yǎng)老項目有三個，分別為海南博鰲休閑度假養(yǎng)老社區(qū)、北京豐臺蓮花池介戶型的養(yǎng)老公寓，以及北京延慶城區(qū)的活躍型的養(yǎng)老社區(qū)。其中，海南博鰲一期工程在2016年春節(jié)期間已經(jīng)部分投入運營?！贝送?，國壽、太保等養(yǎng)老社區(qū)項目也正在積極推進中。
盈利周期過長
值得關(guān)注的是，截至目前險企介入養(yǎng)老產(chǎn)業(yè)仍沒有形成一個行業(yè)行為，由于前期資金投入巨大，因此只有一些經(jīng)濟實力雄厚的大中型壽險公司愿意試水。但各險企的養(yǎng)老社區(qū)已經(jīng)形成了一定的差異化，首先在客戶入住門檻上，泰康、國壽、合眾等均優(yōu)先采取對接保單方式引入，新華及太保則采取直接交費的方式。其次，在價格定位上，泰康、新華等均定位于高端群體，而合眾的價格則相對平民化。
毫無疑問，人口老齡化為養(yǎng)老產(chǎn)業(yè)帶來了巨大的市場需求，一些成熟的養(yǎng)老社區(qū)入住率高達100%，甚至出現(xiàn)排長隊的現(xiàn)象。據(jù)《投資者報》記者了解，目前大中型險企投資建設(shè)的養(yǎng)老社區(qū)首年入住率均超過30%，一年后甚至可達80%～90%。
市場狀況良好，使得保險公司愿意投入數(shù)百億元砸入養(yǎng)老社區(qū)這片藍海，泰康之家上海養(yǎng)老社區(qū)一個項目就投入了40余億元，全國7個項目投資總額約為203億元，合眾武漢優(yōu)年生活社區(qū)投資也近百億。但何時能收回成本，獲取利潤呢？
近年來，不僅是保險行業(yè)，甚至很多房地產(chǎn)大亨也開始涉足養(yǎng)老社區(qū)產(chǎn)業(yè)，但至今為止業(yè)界并沒有成功的盈利案例。由此看來，養(yǎng)老社區(qū)前景誘人，但要從中獲利并非易事。
泰康人壽董事長陳東升曾對媒體坦言稱，一個成熟的養(yǎng)老社區(qū)要做到收支平衡需要6-8年，真正實現(xiàn)盈利要8-10年的時間。
合眾人壽方面則對《投資者報》記者表示，“我們認為，養(yǎng)老社區(qū)盈利的基礎(chǔ)是優(yōu)質(zhì)服務。”合眾人壽下階段將兼顧發(fā)展中高端服務及中端養(yǎng)老社區(qū)服務。
【關(guān)鍵詞】 子宮腺肌病;子宮內(nèi)膜;誘生型一氧化氮合酶;免疫組織化學
子宮腺肌病是婦科常見病，以在子宮肌壁內(nèi)出現(xiàn)子宮內(nèi)膜腺體和間質(zhì)為其病變征，此病多發(fā)生于30～50歲經(jīng)產(chǎn)婦，臨床上往往以子宮增大、痛經(jīng)和月經(jīng)過多為其主要癥狀。近年來對該病的發(fā)生機制提出一些新的看法，關(guān)于血管生成、免疫等方面的異常在子宮腺肌病的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。子宮內(nèi)膜侵入子宮肌層后，血管生成活性的增強，為異位內(nèi)膜的種植生成提供了有利條件[1]。NO可誘導血管內(nèi)皮細胞的分裂增生，調(diào)節(jié)血管生成及血流量， 由此推測可在子宮腺肌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。所以本研究用免疫組化的方法，測定子宮腺肌病患者在位內(nèi)膜與異位內(nèi)膜誘導型一氧化氯合酶(iNOS)的含量， 旨在探討其在子宮腺肌病的發(fā)生發(fā)展過程中所起的作用和意義，為臨床治療提供理論依據(jù)。
1 資料與方法
1.1 標本來源 材料均取本院2006年9月—2008年3月手術(shù)切除并有完整臨床資料的子宮標本，腺肌病組:子宮腺肌病38例，患者年齡35～49歲，平均年齡38.9歲;子宮內(nèi)膜組織學分期:增生期20例，分泌期18例。肌瘤組 :無癥狀子宮肌瘤31例，38～51歲，平均年齡43.2歲;子宮內(nèi)膜組織學分期:增生期17例，分泌期14例兩組患者術(shù)前3個月內(nèi)均未服用任何激素類藥物。所有病例均行子宮全切或次全切除術(shù)，并經(jīng)病理診斷證實。即用型SABC免疫組織化學染色試劑盒(產(chǎn)品編號:SA1022)為武漢博士德生物工程有限公司產(chǎn)品。
1.2 方法 石蠟切片常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，PBS液洗5 min，3%H2O2 5 min，PBS洗5 min;10%山羊血清室溫10 min;一抗(1∶50)，冰箱4℃過夜，PBS洗5 min;二抗(1∶150)37℃溫箱30 min，PBS洗5 min;SABC 30 min，PBS洗5 min;DAB顯色5 min，自來水沖洗;蘇木素復染，脫水透明，封片。
1.3 結(jié)果判定 結(jié)果判斷標準[2]以細胞漿出現(xiàn)黃色顆粒為陽性，表達強度用組織學評分表示。組織學評分為ΣPi，其中i代表細胞漿染色強度，分為4級:0級無黃色顆粒，1級為淡黃色顆粒，2級為黃色顆粒，3級為棕色顆粒;P代表同一染色強度細胞所占計數(shù)細胞百分數(shù)，1、2、3、4、5分別代表染色細胞占計數(shù)細胞總數(shù)的0%～15%、16%～50%、51%～85%、86%～95%、96%～100%。每張切片隨機測定5個高倍鏡視野(200倍)的染色強度，取5個視野的組織學評分均值作為最終得分。
1.4 統(tǒng)計學處理 實驗結(jié)果用x±s表示，采用方差分析和兩兩比較t檢驗，P
2 結(jié)果
iNOS在正?；虍愇粌?nèi)膜腺上皮都有陽性表達，兩組的血管平滑肌也有陽性表達，而在間質(zhì)細胞及子宮平滑肌細胞均未見陽性表達。
2.1 腺肌病組在位子宮內(nèi)膜與肌瘤組子宮內(nèi)膜iNOS組織學評分比較 腺肌病組增殖期或分泌期子宮內(nèi)膜與肌瘤組比較，腺上皮iNOS組織學評分無明顯變化，兩組比較，差異無顯著性(P>0.05)。同時，兩組子宮內(nèi)膜腺上皮的增殖期和分泌期iNOS組織學評分比較，差異無顯著性(P>0.05)，即無周期性變化，見表1。表1 兩組患者正常內(nèi)膜 、異位內(nèi)膜腺上皮細胞iNOS組織學評分比較 注 :*與 肌 瘤 組 正常內(nèi)膜比較，P>0.05 ，與在位內(nèi)膜比較，P0.05
2.2 腺肌病組在位內(nèi)膜與異位內(nèi)膜iNOS組織學評分比較 腺肌病組增殖期或分泌期異位內(nèi)膜腺上皮細胞iNOS組織學評分均較在位內(nèi)膜顯著增加，兩者比較，差異有顯著性(P0.05)，見表1。
2.3 腺肌病組與肌瘤組血管平滑肌iNOS組織學評分比較 腺肌病組血管平滑肌細胞iNOS組織學評分(8.6±1.3)較肌瘤組血管平滑肌細胞iNOS組織學評分(3.5±1.4)顯著增加，兩者比較，差異有顯著性(P
3 討論
內(nèi)源性NO是由一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)以L精氨酸為底物，在還原型輔酶Ⅱ(NADPH)存在下生成，催化該反應的NOS有兩種同工酶，即結(jié)構(gòu)型NOS(constitutive NOS，cNOS)和誘生型NOS(inducible NOS，iNOS)，前者合成的NO含量很小，主要參與人體的正常生理活動，主要存在與內(nèi)皮細胞，神經(jīng)原細胞，腎上腺皮質(zhì)細胞和血小板等。機體內(nèi)iNOS催化產(chǎn)生大量NO主要參與機體的病理生理過程，本研究結(jié)果顯示，腺肌病患者在位子宮內(nèi)膜與子宮肌瘤患者子宮內(nèi)膜iNOS的表達強度無明顯差異，均無周期性變化。腺肌病患者異位內(nèi)膜iNOS的表達強度顯著高于其在位內(nèi)膜。另外Schindl等[1]研究發(fā)現(xiàn)在子宮腺肌病中，在位內(nèi)膜微血管密度與正常內(nèi)膜間無差異，而異位內(nèi)膜則高于在位內(nèi)膜和正常內(nèi)膜，且在月經(jīng)周期中無改變，與本研究結(jié)果一致，說明子宮內(nèi)膜在侵入子宮肌層后，血管生成活性增強。
另外本研究結(jié)果顯示，在腺肌病組，血管平滑肌iNOS表達強度高于肌瘤組，表明NO還通過血管擴張作用，增加血流量，為異位內(nèi)膜種植提供條件。子宮內(nèi)膜異位種植后，由于生理特性的改變[3]，可通過自分泌細胞因子誘導iNOS產(chǎn)生增強而調(diào)節(jié)NO的合成。楊丹等[4]的實驗結(jié)果提示，雌激素與ER結(jié)合后，可能通過增加血管平滑肌細胞的iNOS的活性和蛋白的表達，促進其生成和釋放NO增加。另外，NO可誘導內(nèi)皮細胞的分裂、增生，調(diào)節(jié)血管形成為異位內(nèi)膜的形成創(chuàng)造條件。沒有NO，生長中的腫瘤大小會因血供缺乏而受到限制[5]，也從另一方面提示了血管生成在腺肌病中的重要作用?？傊?，在腺肌病的發(fā)病過程中，異位內(nèi)膜iNOS的高表達，致使NO合成量增加，血管擴張，并利于血管形成，增加血流量，為子宮內(nèi)膜的異位種植和生長提供了有利條件。
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【摘要】 研究缺氧誘導因子1α (HIF1α)及其靶基因血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)在子癇前期患者胎盤組織中的表達和相關(guān)性，探討HIF1α、VEGF在子癇前期發(fā)病機制中的作用。方法：采用免疫組化鏈霉素抗生物素蛋白過氧化酶連接法（SP）法對20例子癇前期患者（子癇前期組）和15例正常妊娠婦女（對照組）胎盤組織中HIF1α、VEGF蛋白表達進行半定量分析；應用RTPCR技術(shù)檢測兩組胎盤組織中HIF1α、VEGFmRNA的水平并進行相關(guān)性分析。結(jié)果：（1）免疫組化結(jié)果顯示，子癇前期組HIF1α蛋白表達明顯增強，其中（+++）陽性表達率分別為45%，顯著高于對照組13.3%（P
【關(guān)鍵詞】 妊娠并發(fā)癥；缺氧誘導因子1α;血管內(nèi)皮細胞生長因子;受體
Abstract0bjective： To investigate the expression and correlation of HIF1α and VEGF in the preeclamptic placenta， aiming to discuss the significance in the pathogenesis of preeclampsia．Methods：Placenta were collected from 20 pregnant women with preeclampsia as study group and 15 normal pregnant women as control group， the expression of HIF1α and VEGF protein were semiquantitatively analyzed with immunohistochemicall assay and mRNA level was determined by using reverse transcription polymerase chain reaction (RTPCR) technique．Results：（1）The expression of HIF1α protein in preeclamptic group obviously increased， with（+++）positive expression rate significantly higher than control group（P
Key wordspreeclampsia；HIF1α；vascular endothelial growth factor；receptor
妊娠高血壓綜合征子癇前期(以下簡稱子癇前期)是妊娠期特有疾病，嚴重危及母嬰健康和生命安全。其發(fā)病機理是病理產(chǎn)科研究的熱點問題，目前較公認的學說之一是，滋養(yǎng)細胞分化和功能異常導致子宮螺旋動脈生理重鑄過程障礙，引起胎盤絨毛淺著床及胎盤缺血缺氧。胎盤氧含量對滋養(yǎng)層相關(guān)的生理和病理有重要的調(diào)節(jié)作用。研究發(fā)現(xiàn)作為激活缺氧反應基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)因子，缺氧誘導因子1α (HIF1α)在低氧條件下可通過調(diào)節(jié)靶基因血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)的轉(zhuǎn)錄，參與多種與血管形成有關(guān)的疾病。本研究采用免疫組化法和RTPCR技術(shù)分別檢測子癇前期和正常胎盤組織中HIF1α、VEGF蛋白和mRNA表達的差異和相關(guān)性，初步探討HIF1α及其靶基因在子癇前期發(fā)病機制中的作用。
1 資料與方法
1.1 研究對象
選擇2007年5月至2007年7月在沈洲醫(yī)院婦產(chǎn)科住院選擇剖宮產(chǎn)結(jié)束妊娠者35例，其中子癇前期20例，孕婦年齡24～34歲，平均 (26.9±1.9)歲，平均孕周（36±2）周;子癇前期的診斷標準參照《婦產(chǎn)科學》（第6版）［1］。正常孕婦15例，年齡25～33歲，平均(27.3±1.4)歲，平均孕周（38±2）周。入選病例均無原發(fā)性高血壓、心臟病、糖尿病、腎病、貧血及前置胎盤等、近期無急、慢性感染。兩組孕婦年齡及孕周差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
1.2 方法
1.2.1 標本采集
胎盤娩出后立即切取近臍帶附著處全層胎盤組織兩塊，每塊1 cm×1 cm×1 cm，用滅菌生理鹽水反復漂洗后分成兩份，一份置入4%中性多聚甲醛固定，用于免疫組化測定；另一份用無菌紗布吸去水分，裝入RNA酶滅活的凍存管，迅速投入液氮中，整個操作在5 min內(nèi)完成，過夜后轉(zhuǎn)入－80℃冰箱保存用于RNA的提取及RTPCR技術(shù)檢測。
1.2.2 免疫組化法檢測胎盤組織中HIF1α、VEGF蛋白的表達
固定標本常規(guī)脫水，石蠟包埋并制成3cm厚度連續(xù)切片，經(jīng)HE染色判斷切片質(zhì)量后，采用鏈霉素抗生物素蛋白－過氧化酶（SP）連接法在同一時間，同一條件下進行免疫組化檢測。鼠抗人HIF1α單克隆抗體、鼠抗人VEGF單克隆抗體均為美國Novus公司產(chǎn)品。染色步驟參照SP試劑盒（北京中山生物技術(shù)有限公司提供）說明書進行，微波修復抗原，一抗滴度均為1：100。 磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作為陰性對照。每張切片觀察l0個高倍視野，根據(jù)陽性細胞比例及著色深淺計分，細胞無著色或無陽性細胞為0分；細胞染色為淺棕色或陽性細胞1%～25%為1分；細胞染色為棕褐色或陽性細胞26%～49%為2分；細胞染色為深棕色或陽性細胞>50%為3分。根據(jù)計分結(jié)果判斷陽性等級：0～1分為（－）； 2分為（+）；3～4分為（++）；5～6分為（+++）。
1.2.3 RTPCR技術(shù)檢測胎盤組織中HIF1α、VEGFmRNA的表達 RTPCR擴增引物根據(jù)Genebank提供的資料設(shè)計，HIF1α、VEGF引物序列見表1。引物及試劑盒由大連寶生生物公司提供。采用Trizol一步法提取胎盤組織總RNA。反應總體積20μl， RNA模板量1μg，參照試劑盒說明進行逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄。PCR反應條件：94℃預變性5min、94℃變性 40s、，52℃退火1 min，72℃延伸1min，在PCR擴增儀上（美國Perkin Elmer公司產(chǎn)品）共完成32個循環(huán)。取5μl PCR產(chǎn)物進行2%瓊脂糖凝膠電泳，β肌動蛋白作為內(nèi)參照，紫外透射成像系統(tǒng)顯像，測定特異條帶的密度并與內(nèi)參照比較，得出目的基因片段的相對表達量。表1 HIF1α、VEGF及βactin引物序列（略）
1.3 統(tǒng)計學方法
采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。所測數(shù)據(jù)以x±s表示，組間比較采用t檢驗和χ2檢驗，相關(guān)資料采用Spearman等級相關(guān)分析。
2 結(jié)果
2.1 兩組孕婦胎盤組織中HIF1α、VEGF蛋白表達的比較
組孕婦胎盤組織中，HIF1α蛋白主要表達在合體滋養(yǎng)細胞和細胞滋養(yǎng)細胞的細胞核中，間質(zhì)細胞少見。子癇前期胎盤組織中陽性表達明顯增強，棕黃色陽性顆粒主要分布在合體滋養(yǎng)細胞中，強陽性表達率為 45%，明顯高于對照組的13.3%，兩組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P
VEGF在兩組孕婦胎盤組織中的分布基本一致，主要分布在細胞滋養(yǎng)細胞，血管內(nèi)皮細胞及絨毛間質(zhì)細胞，在子癇前期組胎盤中VEGF的陽性表達明顯減輕，其中10例染色強度為（+），7例（++），3例（+++）；與對照組相比較，子癇前期組VEGF（+++）陽性表達率為15%，明顯低于對照組，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P
2.2 兩組孕婦胎盤組織中HIF1α、VEGFmRNA表達水平的比較
瓊脂糖凝膠電泳擴增結(jié)果顯示，子癇前期胎盤組織中HIF1α表達水平分別（0.604±0.013）明顯高于對照組的（0.208±0.007），兩組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05);兩組HIF1α、VEGFmRNA表達的圖像分析結(jié)果見表3，瓊脂糖凝膠電泳擴增結(jié)果見圖1。表3兩組孕婦胎盤組織中HIF1α、VEGFmRNA表達水平的比較（略）注：與對照組比較，11P
3 討論
3.1 HIF1α在胎盤組織中的表達及意義
HIF1屬于bHLHPAS蛋白家族，由α和β兩個亞基組成的異二聚體。缺氧條件下HIF1α和細胞核內(nèi)穩(wěn)定存在的HIFβ亞基結(jié)合形成有活性的二聚體，從而調(diào)控缺氧反應基因的表達。目前已經(jīng)證實由HIF1α介導轉(zhuǎn)錄的基因有：VEGF及其受體sFlt1、細胞生成素、內(nèi)皮素1、Bcl2及糖酵解有關(guān)的酶基因等[2]。這些靶基因的產(chǎn)物參與血管的發(fā)生及功能調(diào)節(jié)、細胞能量代謝和細胞凋亡的病理生理過程，是機體對缺氧產(chǎn)生耐受和適應的重要調(diào)節(jié)機制，HIF1α則是缺氧調(diào)節(jié)通路上的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。
在胎盤形成過程中，滋養(yǎng)細胞的侵潤能力決定妊娠的結(jié)局，而滋養(yǎng)細胞的侵潤和胎盤局部氧含量密切相關(guān)，低氧可以促進滋養(yǎng)細胞的增殖和分化卻抑制滋養(yǎng)細胞對子宮內(nèi)膜的侵潤。隨著絨毛間隙血流的增加，滋養(yǎng)細胞的侵潤能力在孕10～12周左右達高峰，然后下降。有研究表明作為氧敏感調(diào)控因子，HIF1α在妊娠早期絨毛組織中的表達與TGFβ3的表達同步，妊娠5-8周表達增高，并于妊娠10～12周胎盤氧含量上升時下降，同時證明低氧分壓條件下培養(yǎng)絨毛組織并用反義核酸抑制HIF1α，可以抑制TGFβ3mRNA的表達，故推測缺氧可通過HIF1α下調(diào)TGFβ3的表達，從而促進早期滋養(yǎng)細胞向侵襲型分化，有利于胎盤血管重鑄[3]。本研究發(fā)現(xiàn)在子癇前期胎盤組織中，HIF1α的蛋白表達明顯增強，其中強陽性表達率顯著高于對照組，同時HIF1αmRNA水平也明顯升高，說明HIF1α從mRNA和蛋白兩個水平參與子癇前期的病理生理過程。
3.2 胎盤組織中VEGF表達的意義
VEGF是一種高效特異的內(nèi)皮細胞有絲分裂原，與其受體sFlt1結(jié)合發(fā)揮強烈的促血管生長及增加微血管通透性的作用。研究表明VEGF及其受體在早孕期主要表達于細胞滋養(yǎng)細胞，而在中、晚孕期主要位于合體滋養(yǎng)細胞，并且滋養(yǎng)細胞源性VEGF可通過旁分泌調(diào)節(jié)滋養(yǎng)細胞的分化和代謝[4]。作為重要的血管誘生因子，VEGF在妊娠早期參與胎盤血管網(wǎng)的形成，而在妊娠晚期主要調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細胞的通透性，有利于胎兒生長發(fā)育。然而關(guān)于VEGF在子癇前期胎盤組織中表達的研究結(jié)論不一，Chun［5］等研究發(fā)現(xiàn)子癇前期胎盤組織中VEGF表達升高同時伴有VEGF受體表達升高，VEGF受體通過抑制VEGF介導的滋養(yǎng)細胞和血管內(nèi)皮細胞功能調(diào)節(jié)，導致子癇前期的發(fā)生。本研究結(jié)果顯示，在子癇前期胎盤組織中，VEGF蛋白表達明顯降低， mRNA表達水平雖有升高，但與對照組比較，差異無顯著性。隨著對VEGF研究的深入，目前至少已發(fā)現(xiàn)4種VEGF分子亞型，它們在生物學和結(jié)構(gòu)特性上有所不同[6，7]，以往研究應用抗體的不同可能是導致這種差異表達的原因，說明對VEGF亞型在子癇前期發(fā)病機制中的作用還需深入研究。
3.3 胎盤組織中HIF1α、VEGF表達的相關(guān)性及意義
作為HIF1α轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的一個靶基因，VEGFmRNA在子癇前期胎盤組織中表達雖有升高但不顯著，VEGF蛋白表達明顯降低，推測是子癇前期細胞滋養(yǎng)細胞功能缺陷的結(jié)果，即缺氧激活HIF1α的表達并誘導下游VEGF基因的轉(zhuǎn)錄，表現(xiàn)為VEGFmRNA代償性升高，但由于滋養(yǎng)細胞功能受損VEGFmRNA升高并不明顯，并且蛋白表達顯著降低，從而影響導致胎盤血管構(gòu)建障礙及血管內(nèi)皮細胞通透性的改變，加重子癇前期的病理變化。
目前認為子癇前期的發(fā)生是滋養(yǎng)細胞侵潤功能障礙導致胎盤血管重鑄不良的結(jié)果，而滋養(yǎng)細胞侵潤受胎盤局部氧含量的精細調(diào)控。本研究結(jié)果提示，作為缺氧敏感調(diào)節(jié)因子的HIF1α在子癇前期胎盤組織中蛋白和mRNA表達均增高，可能通過調(diào)節(jié)下游基因VEGF的轉(zhuǎn)錄影響滋養(yǎng)細胞的侵潤功能，參與子癇前期的發(fā)生發(fā)展。因此關(guān)于胎盤滋養(yǎng)細胞中HIF1α在低氧應激中的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性，以及對下游基因VEGF表達調(diào)控的確切機制有待深入研究，為探討子癇前期的發(fā)病機理提供理論基礎(chǔ)。
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