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內(nèi)容提要:
一、探究式教學(xué)在生物課堂上更有用武之地,并將有損學(xué)生身心的因素減少到最低限度。
二、動、植物活體實驗材料尤其是動物活體走進(jìn)課堂有兩方面的負(fù)面影響。
三、一位中學(xué)生的一份特殊“試驗報告”。
四、負(fù)面影響的危害及應(yīng)對措施的淺見。
中學(xué)生物課是理論與實踐結(jié)合相對緊密的學(xué)科,該學(xué)科突出特點是實踐性很強(qiáng),其中探究性實驗是實踐活動中或曰探究過程中的重要的師生互動中頻繁使用的教學(xué)手段。因為中學(xué)生物學(xué)科中抽象的科學(xué)概念、科學(xué)理論完全能通過實踐活動而達(dá)到輕松地理解和掌握;且動物或植物等實驗材料來源廣泛大多都能就地取材。因此,探究式教學(xué)在生物課堂上更有用武之地,探究式教學(xué)成效顯著是不言而喻的。但是,探究教學(xué)要求每個學(xué)生都積極參與教學(xué)過程,承擔(dān)相應(yīng)的學(xué)習(xí)責(zé)任,因此這種教學(xué)要有效,就必須是一種危險度低的學(xué)習(xí)。學(xué)生既不感到有傷身體,也不感到有失面子,更不能讓學(xué)生因探究感到自卑而變得萎靡不振。這要求教師無論進(jìn)行哪種探究教學(xué),都要考慮到各種探究的可能后果,采取恰當(dāng)措施,把這種有損身心的因素減少到最低限度(《探究教學(xué)的學(xué)習(xí)與輔導(dǎo)》靳玉樂主編P39)。在動、植物活體實驗走進(jìn)課堂之時我們就不能不注意安全問題,就不能不考慮其負(fù)面影響。筆者認(rèn)為,動、植物活體實驗材料尤其是動物活體走進(jìn)課堂至少有兩方面的負(fù)面影響:一是可能對師生的身體造成傷害;一是可能對師生的身心(尤其是對學(xué)生的身心)造成傷害。前者,我們可以采取一定的防護(hù)措施諸如戴口罩、手套,穿防護(hù)衣等就可以避免諸如病毒感染、咬傷、刺傷等對人的侵害,那么對于后者呢?如將一只兔子的腦袋割掉,來探究神經(jīng)如何跳動,這場面對學(xué)生來說是傷害,是學(xué)知識?這有沒有什么措施來防護(hù)呢?這,很顯然就是一個值得探究的安全問題。
我們不妨來看看一位中學(xué)生交上來的一份“試驗報告”:
生死實驗
可是一看到實驗室或者講臺,就想到屠場。一看到生物老師就想起了“劊子手”……
我寧可不學(xué)神經(jīng)知識,也不做“劊子手”。
為學(xué)有關(guān)神經(jīng)知識,我和老師一道,將“善良”的小白兔斬首,來觀察兔子的神經(jīng)如何跳動;有時將“可愛”的青蛙的腦袋釘進(jìn)大頭針,來了解大腦神經(jīng)中樞的作用;偶爾把可惡的老鼠的頸椎折斷,看看它的頸以下的身體有沒有知覺……
原來,神經(jīng)是動物身上的“電路”,動物在“斷電”的情況下,竟如此痛苦,它們都在經(jīng)受折磨之后死去。
按說我應(yīng)該感謝老師能用這么直觀的方式,教給我們一些有關(guān)神經(jīng)知識才是,可是一看到實驗室或者講臺,就情不自禁地想到了屠場,一看到生物老師就身不由己地想起了“劊子手”。一到用動物活體做實驗場面,我仿佛也經(jīng)受了一次生死實驗,似乎看見“康大叔”舉起了砍刀,“夏瑜”的人頭落到地上,他的血被別人當(dāng)成了藥物賣了,去治“華小栓”的“癆病”;似乎看見日本鬼子,手舞東洋戰(zhàn)刀,舉行“”30余萬同胞被剖腹、斷肢、剝皮、砍頭、活埋……生物老師用極其殘忍的手段,直觀地演示一個個屠殺場面,啟發(fā)我聯(lián)想到古今中外的刑場。原來生命這般脆弱!這樣不值錢!
我不知道,我的心靈是否受到了傷害,我只知道,我的心靈在多次撞擊之下而逐漸“斷電”越來越麻木不仁。
有人說“人要有愛心”——是不是胡說?
有人說“動物是人類的朋友”——是不是癡人說夢?
有人說“保護(hù)生態(tài)平衡”——是不是烏托邦設(shè)想?
老師說“神經(jīng)是動物身上的‘電路’”——正確,比喻形象!
神經(jīng)也是人身上的電路,我的心靈不能在生物實驗中“斷電”,我再也不要去做解剖的“幫兇”了!
我寧可不學(xué)有關(guān)神經(jīng)知識,也不做“劊子手”,喚回我的良知,復(fù)位我的人性。
看了這個特殊的“試驗報告”,作為一名生物老師的心是難得平靜的,探究式教學(xué)中的安全問題應(yīng)盡快擺到教學(xué)議事日程上來。中學(xué)生的心理是比較脆弱的,極易受到傷害,即使是一些恐怖、殘忍、不健康等場面或情景,都對學(xué)生的身心造成影響甚至是傷害,這與當(dāng)前實施素質(zhì)教育,“著力培養(yǎng)學(xué)生積極向上的健康心理”的要求相背。生物課的教育同其它學(xué)科的教育一樣,也是對人的教育,教師的熏陶和引導(dǎo)是教育的主導(dǎo)因素,是矛盾的外因,外因能影響內(nèi)因,外因通過內(nèi)因而起作用。因此,注意探究式教學(xué)之中的安全問題應(yīng)從我們教師自身作起,且必須嚴(yán)肅認(rèn)真地對待。轉(zhuǎn)貼于
也許有人問:生物課堂上還要不要去做動物活體實驗?當(dāng)然要做!做實驗由于要求學(xué)生直接參與學(xué)習(xí)過程,有利于形成操作技能,學(xué)生通過做實驗解決問題,所學(xué)到的不僅是問題的答案,他們也學(xué)會觀察、測量、操作和推理,更重要的是學(xué)會獨立學(xué)習(xí)。我們絕不能因其負(fù)面影響而用講實驗去替代做實驗甚至取消實驗。我們不但要重視探究實驗的過程,也要重視結(jié)果,可以“采取恰當(dāng)措施,把這種有損身心的因素減少到最低限度”。諸如將動物活體“斬首”、“截肢”、“剖腹”等殘忍地操作,應(yīng)由現(xiàn)場挪至“幕后”,避開學(xué)生的面,即應(yīng)多多思考:如何明智地選取哪些需要通過探究實驗才能達(dá)到最佳效果的學(xué)習(xí)目標(biāo)以及應(yīng)組織什么性質(zhì)的探究活動的問題,對實驗的整個環(huán)節(jié)作科學(xué)地取舍,舍去那些有害學(xué)生身心的環(huán)節(jié),舍去的環(huán)節(jié)可以用其他教學(xué)策略和手段加以彌補(bǔ)。何況,事實上有許多教學(xué)方法都可以促進(jìn)科學(xué)學(xué)習(xí)目標(biāo)的實現(xiàn),唯“實驗論”是不正確的。再者,由于生物實驗而對學(xué)生造成了傷害完全是教師的“主觀無意”所致,只要我們在探究式教學(xué)的過程中“有意注意”到安全問題,就有條件達(dá)到“把這種有損身心的因素減少到最低限度”的目的。
筆者對探究式教學(xué)中的安全性問題的認(rèn)識還相當(dāng)淺薄,還不能夠提出建設(shè)性的應(yīng)對措施,希望做到“拋磚引玉”。
主要參考書目:
1、靳玉樂主編·探究教學(xué)的學(xué)習(xí)與輔導(dǎo)·中國人事出社,2002.
2、韓永昌主編·心理學(xué)·華東師范大學(xué)出版社,1993.
近年來,科學(xué)家們對人腦與人體免疫系統(tǒng)之間的相互作用,及其對全身健康狀況的影響,進(jìn)行了廣泛深入的研究。關(guān)于心理壓力容易導(dǎo)致疾病的學(xué)說,終于開始受到普遍重視,“心理免疫學(xué)”這門新興學(xué)科也由此獲得了迅速的發(fā)展。人類的免疫系統(tǒng)能夠識別并抵抗細(xì)菌和病毒等侵入體內(nèi)的異物,所以人體對于各種疾病的感受性,在很大程度上取決于免疫系統(tǒng)的功能是否健全。
科學(xué)家們原先以為免疫系統(tǒng)是一種自我調(diào)節(jié)的孤立系統(tǒng),但是最近的研究證明,人腦能夠影響免疫系統(tǒng)的功能,這就意味著,人體對各種病癥的抵抗力,將會受到心理情緒因素的影響心理免疫學(xué)與平常所說的“心身醫(yī)學(xué)”有所不同。心身醫(yī)學(xué)的論及對象是一些完全由心理因素,而非生理原因引起的疾病。心理免疫學(xué)的基本概念是:人腦會影響免疫系統(tǒng),因而也會影響人們對于疾病的抵抗力。
在過去十年中,許多專家研究結(jié)果證明,精神狀態(tài)與疾病的感受性之間的確存在著某些聯(lián)系。美國耶魯大學(xué)的凱斯?fàn)柕热嗽鴮Α跋袤w熱”(傳染性單核白細(xì)胞增多癥)在西點軍校1400名學(xué)員中的傳播情況作過研究。他們發(fā)現(xiàn),二百多名發(fā)病者大多是志向遠(yuǎn)大但學(xué)業(yè)欠佳,其父輩又往往是些“非凡的成功者”。這就意味著,疾病的侵襲對象正是那些軍校生涯中,感受壓力最深的學(xué)員。
疾病與“生活事件”之間的聯(lián)系,是一項頗有爭議的研究課題。所謂“生活事件”,是指那些迫使人們改變現(xiàn)成行為方式的環(huán)境條件變化,如居喪、新婚、得子、解職等等。
進(jìn)行這類研究時,科學(xué)家們首先根據(jù)心理影響的輕重程度給各種生活事件,以一定的標(biāo)準(zhǔn)分值(居喪列首位,為100分、新婚50分、得子39分,如此等等),然后計算出各人最近一段時期內(nèi)生活事件的總分。
分子生物學(xué)實驗教學(xué)教學(xué)改革創(chuàng)新人才培養(yǎng)是時代賦予大學(xué)的歷史使命和義不容辭的歷史責(zé)任。只有培養(yǎng)出具有創(chuàng)新精神和創(chuàng)新能力的創(chuàng)造型人才,才能適應(yīng)社會發(fā)展的需要。實驗教學(xué)作為高校重要的實踐環(huán)節(jié),在創(chuàng)新能力培養(yǎng)方面應(yīng)當(dāng)發(fā)揮重要的作用,傳統(tǒng)的教學(xué)模式和教學(xué)方法,有些內(nèi)容已經(jīng)不符合現(xiàn)代教育思想的要求,新的教學(xué)理念和教學(xué)模式值得研究和探索。
一、兩種實驗教學(xué)模式
過去常規(guī)的實驗教學(xué)一般是以知識的鞏固驗證以及實驗技術(shù)的學(xué)習(xí)掌握為目的,讓學(xué)生通過不同的實驗項目驗證理論知識,獲得感性認(rèn)識,學(xué)習(xí)實驗方法,掌握實驗技術(shù)和儀器設(shè)備使用。這種實驗教學(xué)模式可以稱之為“知識引導(dǎo)的實驗教學(xué)”。
把科學(xué)研究成果移植到實驗教學(xué)中,設(shè)計綜合性的實驗課題項目,將教學(xué)內(nèi)容更新重組,融入課題項目之中,使學(xué)生帶著需要探究的問題開展實驗,此種實驗教學(xué)模式可稱為“課題引導(dǎo)的實驗教學(xué)”。學(xué)生在“實戰(zhàn)”中得以提高素質(zhì)、培養(yǎng)能力、學(xué)習(xí)創(chuàng)新。
二、課題引導(dǎo)的分子生物學(xué)實驗教學(xué)改革實踐
(一)分子生物學(xué)實驗教學(xué)概況
分子生物學(xué)是二十一世紀(jì)的前沿學(xué)科,迅速發(fā)展的分子生物實驗技術(shù)是分子生物學(xué)的一個重要組成部分。普通本科院校生物工程、生物技術(shù)、生物科學(xué)等專業(yè)均開設(shè)分子生物學(xué)實驗課程,一般包括幾個相對獨立的實驗項目,每周完成一個實驗項目,學(xué)習(xí)質(zhì)粒提取、PCR、DNA重組、轉(zhuǎn)化、電泳檢測等實驗技術(shù)以及離心機(jī)、微量移液器、PCR儀、電泳系統(tǒng)等儀器的使用。
(二)用于實驗教學(xué)的課題設(shè)計
用于實驗教學(xué)的課題要符合大綱要求、與教師科研結(jié)合、綜合性強(qiáng)、難度適中。例如,課題“目的基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建及目的蛋白誘導(dǎo)表達(dá)和檢測”,所需教學(xué)課時為32學(xué)時,內(nèi)容包括:目的基因及載體的獲得與檢測、DNA酶切與連接、感受態(tài)制備與重組DNA轉(zhuǎn)化、陽性克隆篩選與鑒定、目的蛋白誘導(dǎo)表達(dá)與檢測等,約十幾個分項目連貫在一個相對完整的研究課題中,成為一個綜合性的分子生物學(xué)實驗。
課題每一個環(huán)節(jié)都相互關(guān)聯(lián),學(xué)生進(jìn)行的每一步實驗都是為下一步打基礎(chǔ)。課題包含了分子生物學(xué)技術(shù)基礎(chǔ)內(nèi)容(基因工程中的基因操作和產(chǎn)物檢測)和分子生物學(xué)發(fā)展前沿性知識(研究項目中涉及到的背景知識),強(qiáng)調(diào)了實驗的綜合性、連貫性和探索性,也便于教師根據(jù)實驗室條件、計劃教學(xué)課時、學(xué)生情況等在每個分項目中添加實驗新的技術(shù)、擴(kuò)充實驗內(nèi)容。
(三)“課題引導(dǎo)的實驗教學(xué)”組織方式
1.每組一題。為了豐富研究內(nèi)容,將學(xué)生按20人左右分成大組,每個大組的課題題目有所不同。可以選擇不同的表達(dá)載體,不同的目的基因,不同的酶切位點,不同的重組載體的檢測方法等。例如,目的基因可為白細(xì)胞介素基因或丙肝病毒C抗原基因;載體可選用溫度誘導(dǎo)型的表達(dá)載體pBV220、化學(xué)誘導(dǎo)型表達(dá)載體pQE-30及用于目的基因測序的T載體;鑒定重組質(zhì)??捎镁wPCR檢測、酶切檢測或藍(lán)白斑檢測。除此之外,還可以進(jìn)一步對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行分離純化、功能鑒定等深入研究。每組完成一個完整課題,但是遇到的問題不完全相同,有了更多分析問題、解決問題的機(jī)會。在每個大組中,2~4名同學(xué)組成實驗小組進(jìn)行實驗,分工協(xié)作。
2.集中實驗。每組用連續(xù)幾天(如4天、32學(xué)時或更多)集中完成整個課題。集中實驗與課題研究的連續(xù)性和完整性相配合。改變以往每周完成一個實驗項目,學(xué)習(xí)一個單一實驗技術(shù)的分散教學(xué)模式。
3.編寫配套教材。編寫的《分子生物學(xué)實驗指導(dǎo)》包含常規(guī)實驗操作方法、常用儀器使用、常用試劑配制、實驗注意事項、問題思考等內(nèi)容,科學(xué)和全面地反映分子生物學(xué)實驗教學(xué)新模式的要求,可為學(xué)生進(jìn)行實驗提供有針對性的指導(dǎo),同時還可以作為學(xué)生課外探究活動的參考。
4.教學(xué)輔助系統(tǒng)的建設(shè)。制作實驗教學(xué)課件、利用學(xué)校的網(wǎng)絡(luò)課程平臺建設(shè)分子生物學(xué)實驗網(wǎng)絡(luò)課程,網(wǎng)絡(luò)課程平臺包括教學(xué)大綱、教案、多媒體課件、教學(xué)資源、教師答疑、網(wǎng)上討論等幾個模塊,并提供動畫、圖表和視頻等素材,豐富的形式和內(nèi)容為學(xué)生提供更便利的課堂外學(xué)習(xí)條件,便于學(xué)生自主學(xué)習(xí)、拓展視野和相互交流。
5.撰寫科技論文形式的實驗報告。實驗結(jié)束后,教師指導(dǎo)學(xué)生就整個課題研究寫一份標(biāo)準(zhǔn)論文格式的實驗報告。通過寫論文,學(xué)會科學(xué)規(guī)范地闡述和展示自己的研究過程和結(jié)果,以及對實驗結(jié)果的分析討論。而不是以往一樣在每個項目后僅寫一份簡單實驗報告。
幾屆學(xué)生的教學(xué)實踐表明,新的教學(xué)模式很好地調(diào)動了學(xué)生的興趣和積極性,收到了良好的教學(xué)效果。很多同學(xué)交出了不錯的論文,從中可以看到學(xué)生認(rèn)真扎實的實驗過程和深入細(xì)致的思考。
三、“知識引導(dǎo)的實驗教學(xué)”與“課題引導(dǎo)的實驗教學(xué)”的比較
(一)兩種實驗教學(xué)模式凸顯不同的教學(xué)理念
“知識引導(dǎo)的實驗教學(xué)”其特點是實驗項目大多是驗證性的、相互孤立的、為了讓學(xué)生掌握知識和技術(shù)而去做實驗。探究和創(chuàng)新的成分較少,前后項目沒有因果聯(lián)系,實驗過程和結(jié)果非常明確,一般不會出現(xiàn)問題也不需要學(xué)生進(jìn)行深入的思考,學(xué)生在教師指導(dǎo)下被動地完成學(xué)習(xí)過程。
“課題引導(dǎo)的實驗教學(xué)”模式中,學(xué)生需要根據(jù)具體的課題自己或與小組成員一起設(shè)計具體實驗流程或判定實驗流程的合理性,為完成課題學(xué)習(xí)新的實驗方法,掌握相關(guān)儀器的使用,對遇到的問題進(jìn)行分析和思考,對實驗結(jié)果進(jìn)行判斷和討論,在實驗過程中獨立思考、獨立操作、主動求知。突出實驗教學(xué)的能力和素質(zhì)培養(yǎng)目標(biāo),知識和技術(shù)的學(xué)習(xí)始終圍繞課題的解決進(jìn)行。
(二)兩種實驗教學(xué)模式達(dá)成不同教學(xué)效果
“知識引導(dǎo)的實驗教學(xué)”和“課題引導(dǎo)的實驗教學(xué)”兩種模式所用的教學(xué)課時相同或相似,但是:前者教學(xué)的主體是教師,學(xué)生圍繞教師的教學(xué)進(jìn)行學(xué)習(xí),后者的主體是學(xué)生,學(xué)生圍繞探究的課題主動展開研究和學(xué)習(xí),教師只起輔助指導(dǎo)作用。
前者教學(xué)內(nèi)容往往是一成不變的,幾個實驗項目可能教幾屆甚至幾十屆學(xué)生,后者可以根據(jù)學(xué)科發(fā)展、教師科研項目、學(xué)生興趣等靈活變換不同的課題題目或探究方向。
前者的教學(xué)過程由于缺乏探究的實戰(zhàn)訓(xùn)練,學(xué)生遇到實際問題時往往不知道怎樣靈活運用所學(xué)知識,而后者的教學(xué)過程是學(xué)生解決實際問題的過程,實踐過程中技術(shù)方法的掌握及能力的養(yǎng)成往往是非常牢固的。
前者以知識和技術(shù)的掌握為教學(xué)目標(biāo)和終點,而后者以課題的解決為目標(biāo),在課題研究的過程中自然會激發(fā)學(xué)生主動求知的積極性,引發(fā)深入的思考、產(chǎn)生更多思想火花,甚至學(xué)生會把探究的習(xí)慣延伸到以后的學(xué)習(xí)生活中,課堂上的實驗教學(xué)成為一種創(chuàng)新能力的引導(dǎo),是創(chuàng)新和探究的起點。
四、“課題引導(dǎo)的實驗教學(xué)”要點和展望
(1)精心設(shè)計。課題選擇應(yīng)限定在教學(xué)大綱要求、教學(xué)課時和學(xué)生實際能力范圍之內(nèi),同時,提出實驗時間安排的建議。不能盲目和隨意,以免影響正常的教學(xué)秩序。
(2)過程把握。備課階段要分析學(xué)生實驗可能遇到的問題,并做好充分準(zhǔn)備,避免因一個實驗環(huán)節(jié)出問題影響后續(xù)實驗。準(zhǔn)備好相應(yīng)的備份材料,以補(bǔ)救學(xué)生可能出現(xiàn)的實驗失敗。
(3)組織有序。教師隨時了解、指導(dǎo)各個小組的實驗進(jìn)度,并充分調(diào)動和發(fā)揮學(xué)生的積極性。組織一部分學(xué)生參與前期準(zhǔn)備,培養(yǎng)熟悉實驗室工作的骨干,使他們在課題研究中起到教學(xué)助手的作用。
(4)不斷創(chuàng)新。鼓勵學(xué)生勇于置疑、勤于思考、善于發(fā)現(xiàn)問題、習(xí)慣分析討論找到解決問題的方法。鼓勵探索、引導(dǎo)創(chuàng)新,在探究實踐中學(xué)習(xí)是新的教學(xué)模式的精髓。
五、結(jié)語
生物學(xué)發(fā)展迅速,新技術(shù)、新理論不斷涌現(xiàn),實驗教學(xué)應(yīng)當(dāng)跟上學(xué)科發(fā)展和技術(shù)的進(jìn)步?!罢n題引導(dǎo)的分子生物學(xué)實驗教學(xué)”把大學(xué)的專業(yè)實驗教學(xué)與教師的科研課題有機(jī)結(jié)合,增加了實驗教學(xué)的綜合性和創(chuàng)新性,解決了新知識新技術(shù)進(jìn)課堂的問題,同時在建立新的實驗教育理念和創(chuàng)新人才培養(yǎng)模式方面也進(jìn)行了初步的探索和實踐。
參考文獻(xiàn):
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從非特異性免疫及特異性免疫兩個方面對中西醫(yī)結(jié)合抗腫瘤機(jī)制進(jìn)行了綜述。
【關(guān)鍵詞】 中西醫(yī)結(jié)合 抗腫瘤 免疫學(xué)
在眾多的對腫瘤治療方法的探索中,各種治療方式的結(jié)果大多不如預(yù)期有效[1],而傳統(tǒng)的化療藥具有明顯的毒副作用及耐藥性,從天然產(chǎn)物中提取可以用于臨床的有效成分激發(fā)機(jī)體免疫系統(tǒng)的活性一直是多年來學(xué)術(shù)界感興趣的重要研究課題。我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)不但具有獨特的優(yōu)勢,而且與西醫(yī)相比,中醫(yī)更重視整體認(rèn)識疾病發(fā)生的條件,強(qiáng)調(diào)“治未病”。中醫(yī)認(rèn)識到正虛是疾病的重要內(nèi)因,即所謂“邪之所湊,其氣必虛”。正虛學(xué)說已被現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)識和承認(rèn)。西醫(yī)比較能融合現(xiàn)代科學(xué)成就,認(rèn)識病癥具體、深入。越來越多的意向認(rèn)為中西醫(yī)應(yīng)當(dāng)互相補(bǔ)充,但如何互相補(bǔ)充又是擺在人們面前的一個迫切需要解決的難題。我們認(rèn)為,這種結(jié)合或補(bǔ)充,不但在于臨床實踐中的摸索,而且還應(yīng)同時解決理論上的問題,只有這樣才能被國際醫(yī)學(xué)界認(rèn)可。現(xiàn)將中西醫(yī)結(jié)合抗腫瘤的免疫學(xué)機(jī)制研究綜述如下。
1 對非特異性免疫抗腫瘤的影響
機(jī)體免疫機(jī)能狀態(tài)的異常及腫瘤免疫逃逸是腫瘤發(fā)生的重要原因,同時腫瘤細(xì)胞及其產(chǎn)生的腫瘤性免疫抑制因子往往導(dǎo)致荷瘤機(jī)體免疫機(jī)能低下,由于腫瘤細(xì)胞抗原性較弱或抗原調(diào)變等因素導(dǎo)致腫瘤特異性免疫往往難以奏效,因此非特異性免疫在機(jī)體抗腫瘤免疫方面發(fā)揮著重要作用。機(jī)體的非特異性免疫包括單核巨噬細(xì)胞及NK細(xì)胞所構(gòu)成的機(jī)體腫瘤免疫監(jiān)視中的第一道防線。
1.1 中西醫(yī)聯(lián)合對巨噬細(xì)胞抗腫瘤的影響欖香烯是從姜科植物溫郁金中提取的抗癌有效成分。將其用專利方法制備出Hca-F欖香烯復(fù)合瘤苗HSP70(HSP70HTCV),分析其對小鼠腹腔或脾臟巨噬細(xì)胞功能的影響及抗免疫作用的機(jī)制,發(fā)現(xiàn)HSP70HTCV免疫小鼠脾臟巨噬細(xì)胞分泌TNF的能力高于HSP70BCG免疫小鼠的脾臟巨噬細(xì)胞,且巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的能力亦明顯增強(qiáng),由此得出結(jié)論[2],HSP70HTCV免疫誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞有更強(qiáng)的殺傷活性。
1.2 中西醫(yī)聯(lián)合對NK細(xì)胞抗腫瘤的影響艾迪注射液聯(lián)合化療藥物環(huán)磷酰胺、長春新堿、阿霉素等對惡性淋巴瘤進(jìn)行的臨床治療研究中,兩個療程后,治療組NK細(xì)胞活性明顯高于對照組,能夠提高化療的耐受性,治療后KPS有明顯地提高,對肝腎功能、骨髓功能無明顯影響[3]。艾迪注射液是由人參、黃芪、刺五加、斑蝥等組成,主要含有人參皂苷、黃芪皂苷、黃芪多糖、刺五加多糖及去甲斑蝥素。研究者認(rèn)為此藥可作為臨床抗腫瘤治療的輔助藥物。那么,分析其藥物成分,再結(jié)合現(xiàn)代藥理學(xué)研究,國內(nèi)外學(xué)者對人參、黃芪、刺五加免疫學(xué)機(jī)制抗腫瘤作用的研究中均得到肯定的結(jié)果[4~9],如研究顯示人參皂苷Rg1和Rh1均可不同程度地增強(qiáng)正常人外周血DC刺激T細(xì)胞的增殖及LPAK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷能力,推測Rg1和Rh1可能促進(jìn)DC合成分泌IL-2和IL-12并提高DC表面共刺激分子的表達(dá),從而增強(qiáng)DC的抗原遞呈能力[6];而斑蝥有抑制腫瘤生長的作用,經(jīng)去甲基處理的斑蝥素在保持其原有療效的同時,可促進(jìn)骨髓造血干細(xì)胞向粒-單核細(xì)胞分化而使白細(xì)胞增加[10]。當(dāng)然,中藥復(fù)方制劑的分析是不能僅以每一成分的作用進(jìn)行簡單的疊加的。另外,艾迪注射液抗瘤作用的免疫學(xué)機(jī)理也是多方面的[11],同時諸如艾迪注射液與化療藥物聯(lián)合這樣通過增強(qiáng)NK細(xì)胞活性發(fā)揮抗癌作用的藥物也還有香菇多糖[12]、益肺顆粒[13]等。
2 對特異性免疫抗腫瘤的影響
機(jī)體對腫瘤的免疫應(yīng)答包括細(xì)胞和體液免疫,兩者相互協(xié)作共同殺傷腫瘤細(xì)胞,但以細(xì)胞免疫為主。
2.1 對細(xì)胞免疫的影響參與抗腫瘤細(xì)胞免疫應(yīng)答的主要有T細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞以及前文中所提及的對特異性細(xì)胞免疫起重要調(diào)節(jié)作用的NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等。
2.1.1 對T細(xì)胞的作用
αβT細(xì)胞:αβT細(xì)胞包括MHC I類分子限制的CD8+CTL細(xì)胞和MHC Ⅱ類分子限制的CD4+輔T細(xì)胞,兩者活化都需要雙信號刺激。第一信號是抗原刺激信號,指從腫瘤細(xì)胞脫落下的腫瘤抗原,經(jīng)APC攝取,加工成抗原多肽,并與細(xì)胞表面MHC Ⅱ類分子結(jié)合遞呈給CD4+ TH細(xì)胞。在腫瘤細(xì)胞合成的腫瘤肽,與MHC I類分子結(jié)合后共同表達(dá)于細(xì)胞表面,而被CD8+ CTL細(xì)胞識別。黃芪注射液聯(lián)合MHC I類限制性腫瘤抗原多肽Mut1致敏的樹突狀細(xì)胞(DC)對肺癌小鼠的治療作用及免疫學(xué)原理的研究中,發(fā)現(xiàn)以腫瘤抗原多肽致敏的DC與黃芪注射液聯(lián)合治療能更有效的促進(jìn)荷瘤宿主的免疫應(yīng)答,具有顯著的體內(nèi)抑制肺癌轉(zhuǎn)移的效果[14]。再說第二類信號,即協(xié)同刺激信號,T細(xì)胞除通過TCR與Ag-MHC分子復(fù)合體接受抗原信號外,還要通過APC或腫瘤細(xì)胞表面協(xié)同刺激信號,才能使T細(xì)胞有效地活化。活化的CD4+T細(xì)胞可產(chǎn)生大量細(xì)胞因子,促進(jìn)CD8+T細(xì)胞活化,激活巨噬細(xì)胞,參與抗腫瘤作用。放化療法配合艾灸神闕穴治療晚期鼻咽癌就有一定的抗腫瘤和抗放化療損傷作用[15],還有如百合固金湯口服聯(lián)合利君派舒靜脈滴注治療肺癌[16],治療組 IL-2,CD3, CD4, CD4/CD8均明顯上升,與治療前比較,差異有非常顯著性意義 (P< 0.01)。
γδT細(xì)胞:γδT細(xì)胞分化發(fā)展早于αβT細(xì)胞,多分布在全身各處上皮組織內(nèi),所發(fā)揮的細(xì)胞毒作用可能不受經(jīng)典MHC分子限制,且能殺傷對NK細(xì)胞不敏感的靶細(xì)胞,因此γδT細(xì)胞與NK細(xì)胞同樣被認(rèn)為是抗腫瘤免疫監(jiān)視功能的第一道防線。已有研究發(fā)現(xiàn)此類細(xì)胞能在體外殺傷骨髓瘤和淋巴瘤的細(xì)胞系[17]等。循環(huán)的Vγ9Vδ2 T細(xì)胞可選擇性的表達(dá)自然殺傷細(xì)胞受體蛋白1A(NKRP1A),NKRPIA 分子的表達(dá)受IL-12水平的調(diào)控,效應(yīng)性T細(xì)胞在殺傷腫瘤時可以釋放IL-12,如此可吸引更多的NKRPIA+的γδT細(xì)胞浸潤腫瘤組織。肺瘤平膏即可上調(diào)DC與抗原遞呈功能相關(guān)膜分子MHC-Ⅱ,CD80,CD83,CD86及CD40的表達(dá),并促進(jìn)DC分泌IL-12水平,提高機(jī)體的抗腫瘤免疫監(jiān)視功能[18]。那么,IL-12水平上升后是否對γδT細(xì)胞產(chǎn)生影響,作者并未做出進(jìn)一步實驗加以證實,同時也未見其他相關(guān)報道。
2.1.2 對樹突狀細(xì)胞的作用樹突狀細(xì)胞具有很強(qiáng)的遞呈抗原的能力,能顯著刺激T細(xì)胞的活化增殖,起抗腫瘤作用?,F(xiàn)代研究認(rèn)為人體免疫功能狀態(tài)即中醫(yī)所指的“正氣”,當(dāng)機(jī)體的免疫功能低下,尤其是細(xì)胞免疫功能低下時,免疫監(jiān)視機(jī)能下降,DC功能低下,正氣虧虛,機(jī)體易患腫瘤。“久病入絡(luò)”“久痛入絡(luò)”,表明“絡(luò)”既是組織細(xì)胞實現(xiàn)功能協(xié)調(diào)的物質(zhì)載體,又是疾病在體內(nèi)傳變的中心環(huán)節(jié)[19]。因而應(yīng)用中藥扶正培本,通絡(luò)解毒,通過干預(yù)和調(diào)節(jié)腫瘤患者DC 的抗原遞呈功能,可能是今后中西醫(yī)結(jié)合防治腫瘤的重要切入點之一[20]。這是在中醫(yī)理論框架內(nèi),把中醫(yī)扶正培本治則即提高機(jī)體抗邪機(jī)能的機(jī)制與DC抗原遞呈功能有機(jī)地結(jié)合,應(yīng)用扶正培本為主的中藥或復(fù)方制劑,作為外源免疫調(diào)節(jié)劑,通過多途徑干預(yù)和調(diào)節(jié)患者DC表面分子的表達(dá),調(diào)節(jié)其抗原遞呈功能,提高患者抗腫瘤機(jī)能,抑制腫瘤形成、增殖、侵襲與轉(zhuǎn)移。這不但在中西醫(yī)結(jié)合理論上進(jìn)行了闡明,而且又研究了其實際應(yīng)用價值,可謂中西醫(yī)結(jié)合解決抗腫瘤問題的典范。
2.2 對體液免疫的影響腫瘤抗原刺激所產(chǎn)生的抗體是通過免疫監(jiān)視而產(chǎn)生保護(hù)性作用的,能被抗體所識別的腫瘤抗原可能是T細(xì)胞活化劑[21]。在用瓊脂擴(kuò)散法測定36例放療加艾灸和30例單純放療病人治療前后的IgG,IgA,IgM后,發(fā)現(xiàn)艾灸組免疫球蛋白明顯高于單純放療組,尤其IgG有非常顯著的意義[22]。針刺曲池、合谷、足三里等穴,對惡性腫瘤放化療患者血清IgG,IgA,IgM含量具有雙向調(diào)節(jié)作用[23]。在腫瘤患者體內(nèi)存在早期階段就出現(xiàn)的針對腫瘤抗原而產(chǎn)生的免疫應(yīng)答[24],抗腫瘤抗原的抗體出現(xiàn)常與正常體細(xì)胞的交叉反應(yīng),引起了許多腫瘤病人的瘤外綜合征[25]。平消膠囊主要成分為郁金、馬錢子粉、仙鶴草、五靈脂、白礬、火硝、干漆(制)、枳殼(熬炒)等藥物,與放療聯(lián)合后能明顯降低血清VCA-IgA,EA-IgA抗體水平,改善生活質(zhì)量,提高近期和遠(yuǎn)期療效[陳緒元,代曉波,張 菊,等. 平消膠囊與放療聯(lián)合治療對鼻咽癌血清VCA-IgA, EA-IgA影響研究.平消膠囊治療腫瘤論文匯編(西安正大有限公司編),2003:122]。這些機(jī)制體現(xiàn)了中西醫(yī)結(jié)合治療惡性腫瘤從體液免疫水平分析,不但發(fā)揮了“免疫激發(fā)劑”的作用,而且還發(fā)揮了“免疫抑制劑”的作用,從多方面調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫水平,正符合中醫(yī)辨證治療,以扶正培本為主的特色及優(yōu)勢。
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3 結(jié)語
中西醫(yī)結(jié)合一直是一個有爭議的話題,因為它們具有兩個不同的理論體系。目前中西醫(yī)結(jié)合存在的問題是:①還沒有真正在發(fā)病機(jī)理及治療機(jī)理方面將中西醫(yī)的理論真正揉合起來或?qū)?yīng)起來;②對抗腫瘤藥物的篩選多為將對腫瘤治療有一定作用的中醫(yī)藥與放化療或其它現(xiàn)行西醫(yī)療法及藥物合用,觀察效果,較為膚淺、生硬,沒有從機(jī)制上加以闡明;③中醫(yī)“辨證施治”“異病同治,同病異治”的理論優(yōu)勢沒有體現(xiàn)出來,大多為將一種中藥與某種西醫(yī)療法連續(xù)應(yīng)用,沒有隨機(jī)體免疫狀況或腫瘤發(fā)展?fàn)顩r的變化而調(diào)整治療方案;④結(jié)合中,中醫(yī)藥大多為輔助治療,幾乎沒有調(diào)整的價值;⑤對于中晚期患者的治療遠(yuǎn)期生存率不高;⑥沒有對中西藥各成分之間的作用進(jìn)行研究。
當(dāng)然,在近幾十年中西醫(yī)結(jié)合方面也取得了很多成績,如扶正類中藥在對放化療耐藥性及副作用治療方面有優(yōu)勢,中醫(yī)藥在輔助西醫(yī)治療中取得了很大進(jìn)展。另外,中醫(yī)藥在腫瘤預(yù)防及康復(fù)領(lǐng)域具有令世人矚目的成就,并且從中西醫(yī)結(jié)合角度得到了國際醫(yī)學(xué)界的認(rèn)可。相信,通過加強(qiáng)國內(nèi)外合作研究,與最新研究成果結(jié)合(如計算機(jī)模擬等),通過強(qiáng)調(diào)高效、實用、綜合,中西醫(yī)結(jié)合會得到全面發(fā)展,中西醫(yī)結(jié)合抗腫瘤研究會取得突破性的進(jìn)展。
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關(guān)鍵詞:艾滋病;中醫(yī)藥;免疫調(diào)節(jié);臨床研究
中圖分類號:R512.91
文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A
文章編號:1007-2349(2011)10-0074-03
艾滋病,即獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS),是由人類免疫缺陷病毒(HIV)侵入人體后破壞人體免疫功能,使人體發(fā)生多種不可治愈的感染和腫瘤,最后導(dǎo)致被感染者死亡的一種嚴(yán)重傳染病。經(jīng)過幾十年的探索研究,中醫(yī)藥在治療艾滋病上取得了肯定的療效。通過中醫(yī)藥的綜合調(diào)理,HIV/AIDS患者的免疫功能增強(qiáng),臨床癥狀改善,生存質(zhì)量提高。但與西醫(yī)藥的HAART相比,中醫(yī)藥治療艾滋病的臨床療效評價一直受到國內(nèi)外研究者的關(guān)注。
由于諸多方面的原因,中醫(yī)藥不能像HAART那樣有效降低病毒載量,而病毒載量和CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)是目前衡量某個藥物是否對艾滋病有效的2個重要指標(biāo),嚴(yán)重影響了中醫(yī)藥治療艾滋病的研究和應(yīng)用。中醫(yī)藥對機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)作用,可能涉及多層次、多環(huán)節(jié)、多靶點,中醫(yī)藥治療艾滋病的臨床研究應(yīng)突出免疫功能變化。筆者認(rèn)為,中醫(yī)藥臨床科研工作者應(yīng)根據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對免疫系統(tǒng)的研究成果,結(jié)合HIV/AIDS患者免疫系統(tǒng)的變化,從多個角度研究中醫(yī)藥治療的HIV/AIDS患者免疫功能變化,為中醫(yī)藥治療艾滋病提高免疫功能療效評價提供科學(xué)依據(jù)。現(xiàn)就開展中醫(yī)藥治療艾滋病臨床免疫研究的意義概述如下:
1 HIV感染后機(jī)體的免疫改變[1~2]
HIV侵入人體后破壞人體免疫系統(tǒng),不僅涉及到T淋巴細(xì)胞的免疫反應(yīng),也涉及天然免疫應(yīng)答和體液免疫。艾滋病的發(fā)病與機(jī)體免疫系統(tǒng)的狀態(tài)密切相關(guān),AIDS患者的免疫病理主要表現(xiàn)為:CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量減少、CD4+T淋巴細(xì)胞功能障礙、異常免疫激活和免疫重建。CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量的減少是多因素所致,可能由于CD4+T淋巴細(xì)胞的破壞增加;CD4+T淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生減少;淋巴組織扣留外周血的CD4+T淋巴細(xì)胞等。CD4+T淋巴細(xì)胞功能障礙主要表現(xiàn)為T輔助細(xì)胞1(Th1)細(xì)胞被T輔助細(xì)胞2(Th2)細(xì)胞代替、抗原遞呈細(xì)胞功能受損、白細(xì)胞介素-2產(chǎn)生減少和對抗原反應(yīng)活化能力喪失,使HIV/AIDS病人易發(fā)生各種感染。HIV感染后機(jī)體免疫系統(tǒng)的異常激活,主要表現(xiàn)為CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞表達(dá)CD69、CD38和HLA-DR等免疫激活標(biāo)志物水平異常的升高,且與HIV血漿病毒載量有良好相關(guān)性,并隨疾病進(jìn)展,細(xì)胞激活水平也不斷升高。
除了與T淋巴細(xì)胞的免疫應(yīng)答失調(diào)外,HIV感染可引起B(yǎng)淋巴細(xì)胞功能失調(diào)。一方面,B細(xì)胞被非特異性地激活,表現(xiàn)為血清中IgG、IgA和IgE的大量產(chǎn)生,另一方面這些B細(xì)胞在受到抗原刺激后,又不能產(chǎn)生特異性的抗體,同時這些B細(xì)胞對刀豆蛋白刺激的增生反應(yīng)也降低。
在體液免疫方面,HIV進(jìn)入人體3~12周后,機(jī)體就產(chǎn)生HIV各種結(jié)構(gòu)蛋白的特異性抗體,有GP120、GP41、P24、P18、RT等。其中除抗GP120 的中和性抗體有抗病毒作用外,其他均無保護(hù)機(jī)體的作用。GP120和GP41包膜蛋白的抗體可誘導(dǎo)ADCC,在這個過程中NK細(xì)胞和擁有Fc受體的單核/巨噬細(xì)胞能識別被抗原抗體包被的細(xì)胞。某些具有中和或非中和作用的抗體可以與補(bǔ)體結(jié)合裂解HIV病毒。機(jī)體感染HIV后,補(bǔ)體可通過經(jīng)典或旁路途徑激活后破壞與其結(jié)合的病毒或病毒感染的細(xì)胞,或增加抗體介導(dǎo)的毒粒溶解作用;補(bǔ)體也可與NK細(xì)胞上的補(bǔ)體受體直接結(jié)合而溶解感染及未感染細(xì)胞,此蛋白還能加強(qiáng)中和抗體的抗病毒效應(yīng)。
天然免疫應(yīng)答在阻止HIV感染和持續(xù)控制感染中也起著重要作用。天然免疫系統(tǒng)通過模式識別受體(PRRs)識別入侵的病原體,與配體相互作用后,PRRs募集引起反應(yīng)的受體分子,通過活化轉(zhuǎn)錄因子如NF-kB而導(dǎo)致細(xì)胞因子的產(chǎn)生。樹突狀細(xì)胞(DCs)表達(dá)的各種C型凝集素在HIV粘附和感染過程中起一定作用;HIV感染的DCs常常保持低水平的復(fù)制,髓樣樹突狀細(xì)胞(MDCs)比漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞(PDCs)對病毒感染和復(fù)制更敏感,DCs能把感染性病毒傳遞給CD4+細(xì)胞。HIV感染降低了NK細(xì)胞的功能,一些NK細(xì)胞亞型能被HIV感染。天然補(bǔ)體因子可影響HIV感染,一方面它們可直接裂解細(xì)胞核殺傷病毒感染的細(xì)胞,另一方面,它們也能通過補(bǔ)體受體促進(jìn)病毒感染。HIV和天然免疫系統(tǒng)有很多種的相互作用,并影響免疫細(xì)胞的數(shù)目以及天然細(xì)胞因子和可溶性成分的產(chǎn)生。
2 中醫(yī)藥治療艾滋病臨床免疫研究現(xiàn)狀
中醫(yī)藥治療艾滋病的優(yōu)勢在于其可通過整體調(diào)節(jié),辨證論治,達(dá)到益氣扶正、補(bǔ)腎固本、活血化瘀及清熱解毒作用,調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能。目前,在我國應(yīng)用于臨床治療的中藥有幾十種,多數(shù)都具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的作用,如中研一號方(艾克沖劑)、克艾可、愛康膠囊、益愛康膠囊、復(fù)方三黃散、三歸片、唐草片、愛可扶正片、扶正袋泡沖劑、艾滋寧、艾滋可寧、艾乃吉Ⅰ號、艾滋康、扶正排毒Ⅰ、Ⅱ號等?;A(chǔ)研究表明上述藥物的調(diào)節(jié)免疫的作用是多方面的,如在體內(nèi)外能協(xié)同刀豆素A刺激小鼠T細(xì)胞增殖,誘生小鼠T輔助細(xì)胞產(chǎn)生IL-2;能增加白細(xì)胞數(shù)量;增強(qiáng)中性粒細(xì)胞吞噬功能;促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞吞噬功能;增加T細(xì)胞及NK細(xì)胞活性;誘生干擾素等等。
而在中醫(yī)藥治療艾滋病臨床研究中,有關(guān)中醫(yī)藥調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的研究報道以對T淋巴細(xì)胞亞群(外周血CD3絕對數(shù)、CD4絕對數(shù)及百分比、CD8絕對數(shù)及百分比、CD4/CD8等)影響的研究為主,趙映前等[3]用扶正抗艾顆粒治療HIV/AIDS患者30例研究,王小平等[4]觀察的艾乃吉Ⅰ號顆粒治療10例HIV/AIDS患者研究,王融冰等[5]用健脾益氣法治療艾滋病38例臨床研究和邱廷山等[6]進(jìn)行的益艾康膠囊治療艾滋病的臨床觀察等,都主要檢查T淋巴細(xì)胞亞群來研究患者免疫功能的變化,但結(jié)果未能全面體現(xiàn)中醫(yī)藥的免疫調(diào)節(jié)作用,臨床中觀察到患者治療后主要癥狀如乏力、納呆、脫發(fā)、腹脹、肌肉痛等明顯改善,但未見患者CD4計數(shù)有明顯上升。
在本院承擔(dān)的云南省中醫(yī)藥治療艾滋病試點項目和相關(guān)研究課題的實施過程中,發(fā)現(xiàn)我院研制的扶正抗毒和康愛保生制劑具有增強(qiáng)免疫功能,減少感冒次數(shù),防治機(jī)會性感染的確切療效;CD4+T細(xì)胞計數(shù)在200~300cell/μL水平時患者接受治療,其CD4+T細(xì)胞計數(shù)明顯上升,臨床癥狀明顯減輕,生存質(zhì)量得到較大提高;有的艾滋病患者的CD4+T細(xì)胞計數(shù)很低(100cell/μL以下),雖然CD4+T細(xì)胞計數(shù)上升不明顯,但患者臨床癥狀明顯減輕,未發(fā)生機(jī)會性感染,CD4+T細(xì)胞計數(shù)高低與病情及機(jī)會性感染并非呈正相關(guān)。這些臨床治療結(jié)果提示中醫(yī)藥治療艾滋病患者在CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量減少和功能障礙時,機(jī)體的免疫系統(tǒng)其它環(huán)節(jié)發(fā)揮了作用,調(diào)節(jié)機(jī)體抗病防衛(wèi)機(jī)制,有效地抵御病原微生物的感染。而目前在臨床科研方面,有關(guān)中醫(yī)藥治療艾滋病的調(diào)節(jié)免疫研究主要集中在T淋巴細(xì)胞數(shù)量和功能方面,不能體現(xiàn)中醫(yī)藥免疫調(diào)節(jié)是多層次、多環(huán)節(jié)、多靶點的特點。
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3 臨床方面應(yīng)多角度探索中醫(yī)藥調(diào)節(jié)HIV/AIDS患者免疫功能的研究 人體的免疫系統(tǒng)具有保護(hù)宿主抵御病原微生物感染、維持自身穩(wěn)定和免疫監(jiān)視的功能。人體的免疫系統(tǒng)遠(yuǎn)不只是免疫細(xì)胞,它只是其中一小部分,自我凈化系統(tǒng)和自我修復(fù)系統(tǒng)才是最根本的免疫系統(tǒng),調(diào)動它們的升降出入機(jī)能和自修復(fù)能力是中醫(yī)祛邪治病的最有效手段。中醫(yī)藥治療艾滋病提高人體免疫功能,其目的不是以抑制、殺滅病原微生物,而是使病原微生物對人體不形成危害,恢復(fù)人體自身免疫平衡。人體免疫系統(tǒng)是一個復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò),任何環(huán)節(jié)都是相關(guān)聯(lián)的,在HIV感染的情況下,其復(fù)雜性更加難以想象,正是這種復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)型結(jié)構(gòu),為中醫(yī)藥抗HIV/AIDS的研究提供了可能。HIV感染引起CD4+T淋巴細(xì)胞水平下降,對條件感染的易感性增加,某些病毒以停止復(fù)制的方式持續(xù)存在于體內(nèi),等待機(jī)體免疫力的下降,機(jī)體的免疫應(yīng)答可以控制但不能消除HIV,補(bǔ)體組分的缺陷引起體液免疫功能障礙,吞噬細(xì)胞缺陷導(dǎo)致廣泛的細(xì)菌感染。中藥在任何一個環(huán)節(jié)介入,都可以使免疫系統(tǒng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,改變其不平衡的病理狀態(tài),使機(jī)體進(jìn)入良性循環(huán)的軌跡。
中醫(yī)藥治療艾滋病能調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能可能涉及免疫系統(tǒng)的多個環(huán)節(jié),多個靶點,在臨床研究方面應(yīng)探索中醫(yī)藥自身規(guī)律和特點,能客觀量化評價其調(diào)節(jié)免疫功能的療效。一方面,利用經(jīng)典免疫功能評價方法來對中醫(yī)藥治療的HIV/AIDS患者的細(xì)胞免疫功能(外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗)、體液免疫功能(單向免疫擴(kuò)散法測定IgG、IgA、IgM)、非特異性免疫功能(吞噬與殺菌試驗)及NK細(xì)胞活性測定,從整體來評價中醫(yī)藥調(diào)節(jié)免疫的作用。另一方面利用現(xiàn)代免疫學(xué)檢測技術(shù)流式細(xì)胞儀和定量酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測等從分子水平或細(xì)胞水平來研究中醫(yī)藥調(diào)節(jié)免疫的作用機(jī)制。
在臨床上,利用流式細(xì)胞儀不僅可以通過檢測外周血T淋巴細(xì)胞及其亞群來研究機(jī)體細(xì)胞免疫功能的改變;也可通過檢測B淋巴細(xì)胞表面抗原CD19、CD20在一定程度上反映出機(jī)體體液免疫功能狀態(tài);CD16和CD56是NK細(xì)胞表面主要標(biāo)志,其中CD16一般表達(dá)于未成熟NK細(xì)胞表面,CD56于成熟NK細(xì)胞表面,二者有交叉。其表達(dá)水平與NK細(xì)胞的整體活性具有相當(dāng)?shù)淖饔?,其下降提示機(jī)體NK細(xì)胞作用受抑制,可以檢測NK細(xì)胞表面抗原(CD16+56)在HIV/AIDS患者外周血中的表達(dá),并檢測活化T、B、NK淋巴細(xì)胞的免疫指標(biāo)(CD3/HLA-DR、CD3/CD25)的變化。還可應(yīng)用流式細(xì)胞儀結(jié)合間接免疫熒光法,可在單細(xì)胞水平上客觀、正確地檢測細(xì)胞內(nèi)多個細(xì)胞因子,并可區(qū)分表達(dá)特定細(xì)胞因子的細(xì)胞亞群,進(jìn)行多參數(shù)相關(guān)分析。
臨床實踐證明中醫(yī)藥治療艾滋病能提高患者的免疫功能,但只用T淋巴細(xì)胞亞群(外周血CD3絕對數(shù)、CD4絕對數(shù)及百分比、CD8絕對數(shù)及百分比、CD4/CD8等)來評價不能涵蓋中醫(yī)藥的特點,應(yīng)在中醫(yī)藥臨床科研方面進(jìn)行積極的探索和創(chuàng)新,從不同角度來研究和評價HIV/AIDS患者免疫功能的改善,尋找多項客觀評價指標(biāo),對我國中醫(yī)藥治療艾滋病的臨床實踐具有重要的指導(dǎo)意義和實用價值。
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[6]邱廷山,李學(xué)芝.益艾康膠囊治療艾滋病的臨床觀察[J].中醫(yī)學(xué)報,2011,26(01):9~10.
我們目前對抗癌癥主要采取三種方法:用外科手術(shù)切除腫瘤,用放療灼燒癌腫,使用毒性和副作用極大的藥物抑制快速分裂的癌細(xì)胞。這三種方法都具有一定的效果,但無可否認(rèn)的是,它們也給人體帶來了巨大的損害——這些治療方法不僅能破壞快速增長的腫瘤細(xì)胞,同時也對患者身體其他部分造成了嚴(yán)重傷害。
在基因組時代,生物學(xué)家挑戰(zhàn)按腫瘤在身體上的生長部位進(jìn)行分類的傳統(tǒng)觀念,尋求在細(xì)胞分子水平上治療癌癥的新途徑,這使得癌癥的治療方式上發(fā)生了重大變革。
當(dāng)了解了傳統(tǒng)的化療和放療之所以有效,是因為它們能破壞分裂增長中的細(xì)胞之后,科學(xué)家就研究出了靶向療法——針對致癌位點(腫瘤細(xì)胞內(nèi)部的某個蛋白分子或某個基因片段)設(shè)計相應(yīng)的治療藥物,它只針對活躍的腫瘤細(xì)胞分子,不會波及到腫瘤周圍的正常組織細(xì)胞,因而不會產(chǎn)生像化療那樣嚴(yán)重的副作用。
靶向治療理念風(fēng)行一時,但它通常也只延長了患者幾個月的生命而已。原因無它,腫瘤細(xì)胞的高突變率使得它們往往能夠避開靶向藥物的攻擊。正因此,醫(yī)生們熱切地期待著新的癌癥治療方法的問世,包括以下幾種目前正處于早期臨床試驗階段的治療方案:RNA干擾療法、納米粒子技術(shù)療法、細(xì)菌療法、免疫療法,以及病毒療法。雖然這些治療方案也許還要經(jīng)過若干年才能正式投入臨床應(yīng)用,但哪怕其中只有一種方案達(dá)到了期望效果,都將成為自70年前化療治療癌癥方法問世以來,癌癥治療領(lǐng)域內(nèi)取得的最大進(jìn)展。
RNA干擾療法
20世紀(jì)90年代問世的RNA干擾治療,代表的是一種自然的細(xì)胞控制機(jī)制——暫時性開啟或關(guān)閉單種基因,它為癌癥治療領(lǐng)域開創(chuàng)了一個新天地。
這一治療理念涉及到如何合成能關(guān)閉特定基因的較短RNA,但我們的細(xì)胞擅長于檢測和摧毀較短的RN斷,因為它們可能看起來很像入侵的病毒。為了克服這一障礙,科學(xué)家正在研究各種巧妙的分子“騙局”。其中一種方法是,將RNA隱藏在脂質(zhì)納米粒子中。一種名為ALN-VSP的藥物就使用了這種技術(shù),目前正試用于治療肝癌,針對目標(biāo)是與腫瘤生長有關(guān)的兩種基因。在一項試驗中,接受這種治療方案的37名患者中,有7名患者體內(nèi)的腫瘤增長得到抑制并停止生長。
專家估計,未來10年里,首個以RNA為基礎(chǔ)的癌癥治療藥物可進(jìn)入臨床使用。
納米粒子技術(shù)療法
基于微觀科學(xué)研究的納米粒子療法可以說是癌癥研究領(lǐng)域內(nèi)的人類救星——雖然納米粒子本身并不具備殺死癌細(xì)胞的能力,但卻可以將現(xiàn)有化療藥物的效力提升到一個全新的水平。
化療的問題是,它不分?jǐn)澄业貧⑺姥杆俜至训募?xì)胞,無論是癌變細(xì)胞還是正常細(xì)胞。由于化療對腸道、皮膚和免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的毒副作用,醫(yī)生們不得不限制藥物的劑量。而將納米粒子技術(shù)與化療治療方案結(jié)合在一起,治療藥物可以有選擇性地針對腫瘤細(xì)胞,因而可以安全地使用更高的劑量。納米顆粒傾向于積聚于腫瘤所在處的部分原因在于,與正常血管相比,微小的納米顆粒更容易滲透進(jìn)入腫瘤細(xì)胞的血管。
一些傳統(tǒng)的化療藥物已經(jīng)開始用納米粒子進(jìn)行封裝處理。納米技術(shù)有望讓療效一般的藥物變得療效顯著,讓好的藥物變得更了不起。
病毒療法
對于病毒來說,破壞人體細(xì)胞是它們的一種自然行為。病毒的生命周期通常為:感染細(xì)胞,然后迫使細(xì)胞產(chǎn)生更多病毒,直到細(xì)胞死亡,釋放出大量新的病毒,再去感染更多的細(xì)胞。
利用病毒的破壞性力量對抗癌細(xì)胞的想法最早出現(xiàn)于20世紀(jì)50年代,各種各樣的病毒被注射進(jìn)入人體腫瘤細(xì)胞內(nèi),但如果感染擴(kuò)散,有時帶來的是致命的后果。不過,今天研究人員使用的是經(jīng)過基因改造的病毒細(xì)胞,它們只感染腫瘤細(xì)胞,并在腫瘤細(xì)胞內(nèi)瘋狂復(fù)制。它們在腫瘤中一路穿行,一路吞噬腫瘤細(xì)胞。
至少有10組經(jīng)過各種遺傳基因修改的不同類型的病毒成為“病毒治療”研究的后備力量。迄今為止,效果最為明顯的例子是利用一種皰疹病毒,將一種叫做GM-CSF的強(qiáng)效免疫化學(xué)物質(zhì),注入黑色素瘤轉(zhuǎn)移患者體內(nèi)。在接受治療的50名患者中,有8名患者的腫瘤在治療后消失。強(qiáng)化病毒治療效果的幾種方法目前仍處于動物研究階段,病毒治療癌癥的潛力還有待于進(jìn)一步開發(fā)。
細(xì)菌療法
俗話說,敵人的敵人就是朋友。雖說誰也不希望細(xì)菌進(jìn)入自己的身體,但如果它們能夠幫助我們擊退癌細(xì)胞,我們可以考慮讓它們成為我們的戰(zhàn)略盟友。
許多細(xì)菌菌株,包括沙門氏菌和大腸桿菌,都有向腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移,并在那里安家落戶的傾向——它們隱藏在腫瘤中心的低氧區(qū),以躲避免疫系統(tǒng)的攻擊,同時以快速分裂的腫瘤細(xì)胞的代謝物為食。和病毒療法一樣,細(xì)菌也可以經(jīng)過基因改造釋放某種毒素或進(jìn)行某種活動。
與病毒療法相比,細(xì)菌療法目前還處于早期階段,臨床試驗個例也不多,但它確實具有某些優(yōu)勢,例如比病毒更容易大批量生產(chǎn),更容易進(jìn)行基因修改。而且,與病毒不同的是,它們可以針對基質(zhì),即構(gòu)成腫瘤細(xì)胞80%的非癌支持細(xì)胞。
2010年的一項實驗表明,無害的腸道細(xì)菌菌株以老鼠的腫瘤為攻擊目標(biāo),即使口服治療也有效果。利用益生菌等不會自然引起疾病的微生物抵御癌癥之前景令人振奮,對于我們的身體來說,它們的存在是無毒無害的,可以聽由它們在身體里做它們要做的事情——成為腫瘤內(nèi)部的抗癌藥物。
免疫療法
在癌癥治療新方法中,呼聲最高的是免疫療法——利用我們自身的免疫系統(tǒng)尋找并摧毀癌細(xì)胞,無論它們在身體里的任何地方。
我們知道,免疫系統(tǒng)具有兩大主要“武器”——免疫細(xì)胞和抗體,而其中能夠破壞癌細(xì)胞的是免疫細(xì)胞。然而,在過去幾十年里,以這種方法對數(shù)百名患者進(jìn)行的臨床實驗,以及無數(shù)的動物試驗,最后都宣告失敗。究其原因,一是腫瘤會發(fā)出讓免疫細(xì)胞功能減弱的信號;更主要的是,經(jīng)過化療和放療的癌癥患者的免疫系統(tǒng)已經(jīng)變?nèi)酢?/p>
“免疫療法”的想法始于19世紀(jì)90年代。當(dāng)時,紐約外科醫(yī)生威廉·科萊偶然發(fā)現(xiàn),一位頸部癌癥患者在經(jīng)歷了一次討厭的皮膚感染之后,竟奇跡般地恢復(fù)了健康。此后幾十年中,科萊不斷“調(diào)制”不同細(xì)菌的混合物并注射到患者的腫瘤中,取得了一些成功的例子。
科萊當(dāng)時可能并不知道,我們身體里的免疫系統(tǒng)一直都在監(jiān)測著癌細(xì)胞,如果我們的身體里出現(xiàn)了癌腫,那是因為我們的免疫防御系統(tǒng)出了問題。偶爾有一些幸運的癌癥患者,他們的腫瘤自發(fā)地萎縮乃至消失。據(jù)推測,是他們體內(nèi)較遲醒來的免疫系統(tǒng)覺察到了危險。
20世紀(jì)初,科萊去世,他的探索暫時沉寂。今天,隨著我們對免疫系統(tǒng)的了解越來越多,借助免疫系統(tǒng)之力來對抗癌癥的想法再次復(fù)蘇。事實上,當(dāng)我們接種疫苗預(yù)防各種傳染病時,就是這么做的。所不同的是,注射麻疹和流感疫苗是以預(yù)防為主,癌癥疫苗是以治療為主。
可以預(yù)見的是,癌癥疫苗的研制最初可以模仿針對細(xì)菌和病毒的預(yù)防性疫苗??山o患者注射某些癌細(xì)胞所特有的蛋白質(zhì),或仍附著有蛋白質(zhì)的已死亡的腫瘤細(xì)胞,同時輔以可向免疫系統(tǒng)亮起示警紅燈的某種化學(xué)物質(zhì)。癌蛋白出現(xiàn)在活細(xì)胞表面,而不是自由漂浮在血液中或附著在死亡癌細(xì)胞上,這正是激起免疫細(xì)胞采取行動所需要的。目前幾種不同的DNA疫苗正在小規(guī)模的早期階段臨床試驗中。
還有研究人員對另一種被稱為“過繼免疫療法”的治療方法產(chǎn)生了更大的興趣。即從癌癥患者身上獲取免疫細(xì)胞,以某種方式進(jìn)行“處理”,然后再將其送回患者體內(nèi)。
美國首次臨床使用這種治療方法是在2010年,用于治療晚期前列腺癌的患者,其平均生存率延長了4個月,每例患者的治療過程都是在實驗室中量身訂做的,這也正是其治療成本高達(dá)10萬美元的原因。
其他類型的過繼免疫治療提供了更令人興奮的結(jié)果。例如,從病人血液中提取的免疫細(xì)胞并不直接殺死癌細(xì)胞,而是將癌細(xì)胞的蛋白質(zhì)“展示”給T細(xì)胞,讓T細(xì)胞來殺死癌細(xì)胞。培養(yǎng)T細(xì)胞的一種技術(shù)是,對手術(shù)切除腫瘤中的T細(xì)胞加以培養(yǎng),然后重新注入患者體內(nèi)。T細(xì)胞在腫瘤中的存在,表明它們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞并視為“外來入侵者”。通過T細(xì)胞與藥物和放療相結(jié)合除去免疫抑制細(xì)胞,幾乎致命的晚期黑色素瘤的治愈率高達(dá)40%。
在開發(fā)免疫系統(tǒng)的潛力方面我們也許還能做得更好。我們還可以通過遺傳工程,將能夠識別已知癌蛋白的受體基因引入T細(xì)胞,讓T細(xì)胞殺死癌細(xì)胞。
以這種方式將過繼免疫治療與基因治療相結(jié)合是最新的研究課題之一,它的效果會有多好,現(xiàn)在下結(jié)論還為時過早。到目前為止,已在幾十例絕癥患者身上進(jìn)行了臨床試驗,部分患者的情況顯示,經(jīng)過基因工程改造的T細(xì)胞擁有真正的癌癥治療潛力。一項研究報告指出,2/3的白血病患者的病情得到了充分緩解。
我們過去說要“戰(zhàn)勝癌癥”,而現(xiàn)在我們要說“與癌共存”。人類與癌癥“你死我活”的“戰(zhàn)爭”也許可以休戰(zhàn)了。
1998年5月,一名死于腦溢血的患者的兩個腎被分別捐贈給一名男子和一名女子。18個月后,那名女子的處發(fā)現(xiàn)腫瘤,4個月內(nèi)死亡。2000年5月,那名男子的腎臟發(fā)現(xiàn)了腫塊,經(jīng)活組織切片檢驗證實:他得了癌癥。
那位器官捐贈者在15年前曾患有惡性黑色素瘤,不過已治愈,并一直處于嚴(yán)密監(jiān)控中,癌細(xì)胞并無卷土重來的跡象。然而,當(dāng)黑素瘤細(xì)胞隨著被移植的腎臟一起進(jìn)入被捐贈者的體內(nèi)后,癌細(xì)胞被重新喚醒,造成了可怕的后果。
為了與癌癥抗?fàn)帲撃凶油7擞脕矶糁粕眢w免疫系統(tǒng)的藥物,結(jié)果他失去了腎,只能靠透析治療維持。然而,奇跡出現(xiàn)了:在停用免疫系統(tǒng)抵制劑后,該男子的免疫系統(tǒng)恢復(fù)了正常,而與此同時,癌癥也消失了!為什么會這樣?現(xiàn)在仍是一個謎。癌細(xì)胞有可能潛伏在人體內(nèi)的理論并不是新近才有的,但免疫系統(tǒng)“壓制”著某些癌癥讓其不敢“輕舉妄動”卻是最近才發(fā)現(xiàn)的,如果免疫學(xué)者能夠?qū)W會模仿這一過程,人類就有機(jī)會讓腫瘤細(xì)胞永遠(yuǎn)處于被控制狀態(tài)中。
這一罕見案例給我們帶來了令人興奮的啟示:人或者可以與“休眠腫瘤”共生共存。
免疫系統(tǒng)一直在監(jiān)視著身體內(nèi)出現(xiàn)的不尋常的情況,包括出現(xiàn)異常的、有轉(zhuǎn)變?yōu)榘┘?xì)胞可能的細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn),一種老鼠擁有極強(qiáng)大的免疫系統(tǒng),可迅速摧毀注入其體內(nèi)的任何癌細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞被注射到這些老鼠體內(nèi)后,免疫細(xì)胞迅速包圍并摧毀了癌細(xì)胞。將具有高強(qiáng)抗癌能力的免疫細(xì)胞注入患者體內(nèi)——這一具有戰(zhàn)略意義的研究項目已經(jīng)在實驗鼠身上取得了明顯的成效。
關(guān)鍵詞:天然藥物;腫瘤;篩選方法
【中圖分類號】R969.3 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B 【文章編號】1672-3783(2012)08-0259-02
1 動物移植性腫瘤實驗法
1.1 概況:迄今為止,動物移植性腫瘤實驗法仍是最通用的方法?,F(xiàn)有移植性腫瘤接種成功率高達(dá)100%,可在同一時間內(nèi)獲得大量(幾十至數(shù)百只或更多)生長相對均勻的腫瘤,以供實驗所需。動物多選用小鼠,偶亦見大鼠和地鼠,均雌雄皆可,但每批實驗只用一個性別;一般給藥7~14d,在第8~15天可解剖動物獲得結(jié)果。該方法可以判斷在動物耐受劑量下,藥物是否有明顯抑制腫瘤生長的作用,這是任何體外試驗不能代替的,其結(jié)果可作為判別抗癌藥物臨床療效的有意義的根據(jù)。
藥物抗腫瘤篩選時,最好采用3種瘤株,即肉瘤、腹水性腫瘤和白血病株,國內(nèi)常采用S180、艾氏癌腹水型和小鼠白血病株。然而,一種藥物未必對各種類型的動物移植性腫瘤都有效,選擇單一瘤株來篩選可能漏篩藥物,特別是動物腫瘤的生物學(xué)特點與人的有較大差距時,假陰性的可能性更大。因為動物瘤株惡性程度高,生長迅速,對藥物的敏感性比人類自發(fā)的癌瘤高得多,因此認(rèn)為本法的命中率低。美國國立癌癥研究所(NCI)為了要尋找對人癌特定細(xì)胞有效的藥物,采用人癌(主要是肺癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌、肝癌、胃癌等)細(xì)胞株經(jīng)體外試驗法初步篩選有效的藥物,然后將人癌細(xì)胞接種到T細(xì)胞免疫缺陷的裸小鼠或免疫抑制小鼠造模,以確證藥物對人癌的作用。我國對新藥在以上第一輪篩選有效的基礎(chǔ)上,也推薦人癌細(xì)胞異種移植模型進(jìn)行第二輪篩選。
1.2 瘤株選擇:目前臨床上常用的抗腫瘤藥大多首先經(jīng)動物移植性腫瘤篩選而發(fā)現(xiàn)的,從尋找新藥角度看來,按照我國目前條件和情況,篩選細(xì)胞毒類藥物可選用肉瘤S180實體性、艾氏癌腹水型(EAC)、肝癌Hep腹水型(HAC)或?qū)嶓w型(H22)、Lewis肺癌LL、白血病P388或L1210、黑色素瘤B16、肉瘤S37、腸癌C38、C26及瓦克癌肉瘤W256等。
1.3 療效評價
1.3.1 實體瘤:天然藥抑制率大于30%,化學(xué)藥大于40%,且經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理有顯著差異時,認(rèn)為有苗頭,需繼續(xù)重復(fù),連續(xù)3次,療效穩(wěn)定,則評定此藥有一定療效。
1.3.2 腹水性腫瘤:實驗期間逐日記錄動物的死亡情況。模型對照組動物通常在2~3周內(nèi)全部死完,個別存活時間太長需剔除,但各組亦應(yīng)相應(yīng)剔除一只。如治療期間模型對照組動物于7d內(nèi)死亡超過20%,表示實驗失敗;反之,若對照組20%動物存活4周以上,實驗亦應(yīng)作廢。治療組觀察時間一般為30 d(生存超過此限者,仍按30 d計算)。其療效以生長延長率表示,計算公式如下:生長延長率(%)=(T/C-1)×100%,其中T指給藥組平均存活時間,C指模型對照組平均存活時間。
2 腫瘤細(xì)胞體外篩選法
細(xì)胞生物學(xué)、分子藥理學(xué)、分子生物學(xué)、生物化學(xué)等學(xué)科的發(fā)展為藥物篩選提供了新的方向。細(xì)胞水平的藥物篩選模型具有材料用量少、藥物作用機(jī)制比較明確和大規(guī)模篩選等優(yōu)點。目前,在細(xì)胞水平上對抗腫瘤天然藥物的篩選主要是采用選取幾種腫瘤細(xì)胞系,以培養(yǎng)細(xì)胞為實驗?zāi)P停媒Y(jié)晶紫染色測定法、噻唑藍(lán)(MTT)法、麗絲胺羅丹明B(SRB)法等檢測天然藥物及其提取物或單體的體外抗腫瘤作用。
3 作用微管蛋白的天然抗腫瘤藥物的篩選方法
微管是由僅αβ微管蛋白異二聚體聚合而成的管狀聚合物,是真核細(xì)胞骨架的重要組成部分。微管參與許多細(xì)胞功能,包括維持細(xì)胞形態(tài)、胞內(nèi)物質(zhì)的運輸、細(xì)胞器的定位、鞭毛和纖毛的運動、染色體運動和細(xì)胞分裂等。無論是促進(jìn)微管蛋白聚合、穩(wěn)定已形成的微管類藥物,還是以抑制微管蛋白聚合類藥物都通過影響腫瘤細(xì)胞的有絲分裂過程,使其生長受到抑制。作用于微管的藥物如紫杉醇和長春新堿正是通過上述機(jī)制達(dá)到抗腫瘤目的,且與其他類型藥物相比具有更好的療效。因此,微管已成為腫瘤的臨床治療的有效靶點。
4 應(yīng)用腫瘤新生血管生成抑制的篩選方法
實體瘤的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移依賴于血管生成。在腫瘤的新生血管是實體瘤的一個重要因素,它為腫瘤的生長提供必需的營養(yǎng)和氧氣。在其生成過程中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)以及酪氨酸激酶受體(VEGFR)具有極其重要的作用。目前已發(fā)現(xiàn)有許多天然藥物及其有效成分可以通過多種途徑來抑制腫瘤新生血管的生成,如人參皂苷Rg3、紅素、熊果酸等。
5 端粒酶活性為作用靶點的篩選方法
端粒酶是維持端粒長度的逆轉(zhuǎn)錄酶,對細(xì)胞增殖、衰老及永生化和癌變起重要作用,在多數(shù)腫瘤中表達(dá)較高。實驗證明端粒酶與惡性腫瘤密切相關(guān),因此端粒酶已成為當(dāng)前腫瘤治療的靶點之一。
6 以DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶為靶點篩選天然抗腫瘤藥物
DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶是真核細(xì)胞和原核細(xì)胞中的基本酶,廣泛分布于細(xì)胞核內(nèi),通過DNA鏈的切割、轉(zhuǎn)移和再連接來改變DNA的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶在細(xì)胞代謝過程中起著極其重要的作用,如DNA復(fù)制、基因轉(zhuǎn)錄、翻譯、DNA重組和有絲分裂等??拱┧幬锵矘鋲A及其衍生物的作用靶點是真核生物DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ,吖啶類化合物、鬼臼毒素類化合物、異黃酮類化合物、阿霉素等則作用于真核生物DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ。
這些藥物可通過DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ、Ⅱ引起DNA雙螺旋的一條或兩條鏈的斷裂從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的死亡。
7 結(jié)語
正確的研究方法和科學(xué)的思路在天然藥物抗腫瘤的實驗研究中起關(guān)鍵的作用,體內(nèi)動物移植瘤實驗、體外細(xì)胞實驗、作用微管蛋白的天然抗腫瘤藥物的篩選方法、應(yīng)用腫瘤新生血管生成抑制的篩選方法、端粒酶活性為作用靶點的篩選方法、以DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶為靶點篩選天然抗腫瘤藥物、應(yīng)用調(diào)節(jié)細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路篩選方法、天然藥物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的篩選、天然藥物誘導(dǎo)細(xì)胞分化的篩選等方法,但都有各自的優(yōu)缺點,分析結(jié)果時要注意多種影響因素的相互作用。相信,隨著分子生物學(xué)、免疫學(xué)、分子藥理學(xué)及天然藥物提取和分離技術(shù)等的發(fā)展和成熟,天然藥物的抗腫瘤研究方法和臨床應(yīng)用將會有更大的進(jìn)展。
參考文獻(xiàn)
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【關(guān)鍵詞】預(yù)防醫(yī)學(xué);設(shè)計性實驗;教學(xué)改革;效果評價
【中圖分類號】R1 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B 【文章編號】2095-3089(2014)20-0262-01
基金項目:青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院教學(xué)改革項目(qyjg-201205)。
設(shè)計性實驗是指在給定實驗?zāi)康?、結(jié)合實驗條件的前提下,學(xué)生根據(jù)自己所掌握的專業(yè)知識自主設(shè)計實驗方案、準(zhǔn)備實驗、完成實驗。設(shè)計性實驗?zāi)芴岣邔W(xué)生的學(xué)習(xí)興趣,培養(yǎng)學(xué)生創(chuàng)新能力、實際運用能力及團(tuán)隊協(xié)作能力。在設(shè)計性實驗中,以學(xué)生為主體,充分給學(xué)生自由發(fā)揮能力的空間,是培養(yǎng)學(xué)生創(chuàng)新能力的重要途徑之一。因此,開設(shè)一些讓學(xué)生自己設(shè)計實驗方案、自己動手進(jìn)行的設(shè)計性實驗,為今后的工作打下堅實的基礎(chǔ)。
1、對象與方法
1.1對象采用整群隨機(jī)抽樣的方法,在開設(shè)流行病學(xué)課程的班級中隨機(jī)抽取不同專業(yè)班級6個,分別在不同班級中實施設(shè)計性實驗,并在實驗后采用調(diào)查問卷的形式對教學(xué)效果進(jìn)行評價,共調(diào)查6個班292人,問卷回收率100%,有效應(yīng)答率100%。
1.2實施方法
(1)科研知識的普及:在開設(shè)設(shè)計性實驗之前,由指導(dǎo)老師以講座的形式介紹學(xué)科體系框架與前沿領(lǐng)域、醫(yī)學(xué)研究的基本知識、實驗的基本操作技能、文獻(xiàn)檢索的方法、實驗結(jié)果的統(tǒng)計分析、論文的格式等相關(guān)內(nèi)容。
(2)選題:結(jié)合理論課內(nèi)容及可行性,擬定兩個實驗項目供學(xué)生選擇,分別為病例對照研究和傷害流行病學(xué),學(xué)生根據(jù)自己的興趣愛好選題,選擇同一研究課題的學(xué)生以自愿為原則組成實驗設(shè)計小組。
(3)研究方案與開題:學(xué)生利用課余時間查閱文獻(xiàn),了解本研究實施的意義及國內(nèi)外研究現(xiàn)況,根據(jù)實驗條件確定研究內(nèi)容和實施方案,并呈報指導(dǎo)老師。
(4)課題實施:學(xué)生按自己設(shè)計的研究方案獨立開展課題研究,并記錄研究數(shù)據(jù)。
(5)撰寫論文:學(xué)生將收集到的資料進(jìn)行整理、分析并進(jìn)行相關(guān)論文的撰寫。
(6)評分:設(shè)計性實驗考核的內(nèi)容為實驗的開題報告、課題現(xiàn)場實施和論文撰寫三個方面,滿分15分,其中三部分各占5分。
1.3統(tǒng)計方法:采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行資料的錄入和分析。
1.4質(zhì)量控制學(xué)生進(jìn)行實驗的每一個步驟教師均進(jìn)行監(jiān)督指導(dǎo),保證各個環(huán)節(jié)順利進(jìn)行。
2、結(jié)果
2.1實施流行病學(xué)設(shè)計性實驗教學(xué)意向性調(diào)查
表1不同專業(yè)醫(yī)學(xué)生對設(shè)計性實驗的態(tài)度
專業(yè) 開展設(shè)計性實驗的必要性 是否能提高綜合能力
有必要(%) 沒必要(%) 是(%) 否(%)
臨床 102(97.1) 3(2.9) 103(98.1) 2(1.9)
預(yù)防 41(95.3) 2(4.7) 42(97.7) 1(2.3)
護(hù)理 52(92.9) 4(7.1) 54(96.4) 2(3.6)
檢驗 34(94.4) 2(5.6) 36(100.0) 0(0.0)
藏醫(yī) 46(88.5) 6(11.5) 45(86.5) 7(13.5)
表1結(jié)果顯示,不同專業(yè)學(xué)生均認(rèn)為有必要開展設(shè)計性實驗,98.1的臨床專業(yè)學(xué)生認(rèn)為設(shè)計性實驗?zāi)芴岣邔W(xué)生的綜合素質(zhì)。
2.2不同實驗實施效果評價
表2不同實驗在不同專業(yè)醫(yī)學(xué)生中實施效果比較(±s)
專業(yè) 驗證性 設(shè)計性 t值 P值
臨床 11.90±1.23 14.47±0.87 21.033 0.000
預(yù)防 11.55±1.00 13.52±0.11 12.966 0.000
護(hù)理 11.88±1.30 14.34±0.48 13.934 0.000
檢驗 12.50±0.51 14.82±0.56 22.345 0.000
藏醫(yī) 11.69±1.96 13.94±1.90 5.896 0.000
表2結(jié)果顯示,對同一個實驗在同一班級中分別進(jìn)行驗證性和設(shè)計性實施,各個專業(yè)的學(xué)生設(shè)計性實驗分?jǐn)?shù)均高于驗證性實驗,不同專業(yè)學(xué)生對不同教學(xué)方法存在統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.00)。
3、討論
本次調(diào)查結(jié)果顯示,臨床專業(yè)有意愿進(jìn)行設(shè)計性實驗的人數(shù)占97.1%,需求最低的專業(yè)為藏醫(yī)專業(yè),這可能與所學(xué)專業(yè)的差別有關(guān);另外,被調(diào)查的檢驗專業(yè)學(xué)生全部認(rèn)為設(shè)計性實驗?zāi)芴岣邔W(xué)生的綜合能力,其余專業(yè)認(rèn)為可提高綜合能力也占到了90%以上;所以,設(shè)計性實驗較驗證性實驗更能發(fā)揮學(xué)生的主動作用。其次,對同一班級同一實驗內(nèi)容分別進(jìn)行驗證性和設(shè)計性教學(xué)后,學(xué)生實驗成績結(jié)果顯示,設(shè)計性實驗成績高于驗證性實驗,兩者存在統(tǒng)計學(xué)差異,進(jìn)一步說明說明驗證性實驗更能提高學(xué)生對理論課的理解和發(fā)揮自身的積極性和主動性。
因此,實踐證明,傳統(tǒng)實驗教學(xué)并未對教學(xué)質(zhì)量的提高起到很大的作用,而設(shè)計性實驗的開展中,指導(dǎo)老師要負(fù)責(zé)啟發(fā)引導(dǎo)學(xué)生的思維,并在課題的設(shè)計、實施和論文的撰寫各個環(huán)節(jié)中進(jìn)行把關(guān),這對老師提出了更高的要求,老師除了具有扎實的專業(yè)理論基礎(chǔ)以外,還要查閱文獻(xiàn)資料,對自身的“知識庫”不斷更新和拓展,掌握相關(guān)的專業(yè)知識,同時還要求具有一定的科研素質(zhì)。同時也要求指導(dǎo)老師在時間和精力上有更多的付出,要有良好的師德和嚴(yán)謹(jǐn)?shù)慕田L(fēng),能及時解答學(xué)生在所提出的各種問題。從而促進(jìn)了教學(xué)工作的改進(jìn)和提高了教學(xué)質(zhì)量。
參考文獻(xiàn)
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(一)改革實驗內(nèi)容,探索實驗教學(xué)新模式。
1.增加綜合性、設(shè)計性實驗內(nèi)容比例,不斷進(jìn)行實驗內(nèi)容改革:根據(jù)實驗教學(xué)大綱要求,結(jié)合具體的實驗內(nèi)容,先講授理論課,然后根據(jù)理論課的內(nèi)容針對性設(shè)計配套的實驗組合,增加綜合性實驗的比例。例如:以前關(guān)于缺鐵性貧血,上完理論課后緊接著看血液片子,對理論課只是簡單驗證,改革后我們根據(jù)該病的診斷標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計一套綜合實驗組合:從臨床表現(xiàn)入手,血片、骨髓片、骨髓片鐵染色、代謝指標(biāo)的選擇和檢測,每個環(huán)節(jié)環(huán)環(huán)相扣,最后綜合分析得出診斷意見,學(xué)生通過綜合實驗組合對缺鐵性貧血的診斷思路有清晰的脈絡(luò),理論聯(lián)系實際,既鞏固了理論知識,又激發(fā)了學(xué)生實驗的熱情和興趣。2.實驗?zāi)J降奶接?檢驗專業(yè)的特點是實踐操作多,動手能力強(qiáng),僅僅依靠實驗課堂上有限的時間顯然是不夠的,要熟練掌握各環(huán)節(jié)就必須經(jīng)常練習(xí),
為此我們將實驗教學(xué)大部分內(nèi)容以“半開放式”或“全開放式”教學(xué)模式進(jìn)行。“半開放式”教學(xué)主要是一些技術(shù)性比較強(qiáng)的實驗課,這些實驗往往持續(xù)時間較長,如造血干細(xì)胞的培養(yǎng)、染色體檢查、白血病分化抗原的免疫學(xué)檢查和白血病的分子生物學(xué)診斷等實驗。先在實驗老師帶領(lǐng)下參與部分試劑或器材的準(zhǔn)備工作,然后再根據(jù)內(nèi)容和時間的要求安排完成下一階段實驗。“全開放式”教學(xué)主要針對常規(guī)檢查試驗。我們每月至少開放1次實驗室,可根據(jù)學(xué)生要求適當(dāng)增加開放實驗室的次數(shù)或時間,盡可能的滿足學(xué)生需求。對于骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)采用多媒體形態(tài)教學(xué),然后再讓學(xué)生對照血細(xì)胞圖譜進(jìn)行觀察,并對特殊細(xì)胞及無法辨認(rèn)的細(xì)胞進(jìn)行繪圖,在老師的帶領(lǐng)下共同討論進(jìn)行辨認(rèn),最后讓學(xué)生寫出骨髓報告單。實施半開放式和開放式實驗教學(xué),學(xué)生親自參與大部分實驗準(zhǔn)備,自己主動完成實驗內(nèi)容,避免了以前實驗課教師準(zhǔn)備實驗,學(xué)生被動應(yīng)付,不注意調(diào)動思維進(jìn)行積極思考的弊端。另外利用業(yè)余時間開放實驗室,可增加學(xué)生的操作時間,及對學(xué)生選擇部分小課題進(jìn)行科研基本訓(xùn)練。
3.增加臨床見習(xí):我們拿出1/10的實驗學(xué)時組織學(xué)生到臨床檢驗科見習(xí)各種病人,從疾病的臨床表現(xiàn)和臨床診斷入手,讓他們參與標(biāo)本穿刺,自己動手制作骨髓涂片—染色—顯微鏡觀察—細(xì)胞化學(xué)染色—制作骨髓報告—結(jié)合臨床作出最后診斷。使學(xué)生對疾病特別是血液病的診斷過程有一個系統(tǒng)的實踐認(rèn)識。
(二)實驗課程大綱、計劃、教材的改革與實踐。
在總結(jié)教學(xué)經(jīng)驗的基礎(chǔ)上,逐年積累教學(xué)資料,總結(jié)教學(xué)經(jīng)驗,逐步完善課程大綱、實驗教學(xué)大綱、教學(xué)計劃及使用教材配套體系。在使用國家規(guī)劃教材的基礎(chǔ)上,結(jié)合我系醫(yī)學(xué)檢驗實驗教學(xué)特點,組織編寫實用性、適合性更強(qiáng)的《臨床血液學(xué)與血液學(xué)檢驗實驗指導(dǎo)》及配套CAI課件,補(bǔ)充完善實驗教材中常見實驗內(nèi)容、特別在臨床實際工作中經(jīng)常用到的實驗內(nèi)容。
(三)改革教學(xué)考試形式,加大實驗考試所占比重。
充分考慮到醫(yī)學(xué)檢驗實驗操作的特殊性,改革考試形式和內(nèi)容:改革原來純理論考試,增加實驗考試所占比重,實驗成績占整個考試成績的40%;對實驗考試內(nèi)容也進(jìn)行改革,如采取實驗筆試、實驗技能操作、顯微鏡分辨鏡下形態(tài)結(jié)構(gòu)并和出勤、實驗報告相結(jié)合,綜合判定實驗成績。(六)加大實驗教學(xué)體系的效果觀察與反饋機(jī)制。建立多種形式的反饋渠道,及時反饋“教與學(xué)”的信息,使“教與學(xué)”更好地統(tǒng)一起來。具體內(nèi)容有:學(xué)生座談會及學(xué)生問卷調(diào)查形式,定期聽取學(xué)生反饋意見及時調(diào)整實驗課的內(nèi)容,完善每一個實驗內(nèi)容。
二、實踐教學(xué)改革結(jié)果
我們通過改革以上各種教學(xué)環(huán)節(jié),使學(xué)生在短短的一學(xué)期內(nèi)既掌握了主干課程的主要內(nèi)容,又提高了綜合素質(zhì)。在總結(jié)教學(xué)經(jīng)驗的基礎(chǔ)上,逐年積累教學(xué)資料,
總結(jié)教學(xué)經(jīng)驗,逐步完善課程大綱、教學(xué)計劃及使用教材配套體系。我們自己編寫了《臨床檢驗實驗指導(dǎo)》,選擇實際工作中常做的實驗充實到此教材中,收到了良好的效果。開放性教學(xué)培養(yǎng)了學(xué)生獨立完成實驗的能力和創(chuàng)新能力。從成績結(jié)果分析看,隨著教學(xué)方法的改革,成績逐漸得到提高,及格率從90.1%提高到98.7%。新老教師齊心協(xié)力,通過各種途徑提高自己的專業(yè)知識水平和外語水平。近5年中,教研室完成了科研課題4項,1項獲省科技進(jìn)步三等獎,2項獲濟(jì)寧市應(yīng)用成果三等獎;完成教學(xué)研究課題2項,1項獲廳級教學(xué)成果三等獎,1項獲院教學(xué)成果一等獎。還有5項科研和教學(xué)課題正在研究中,實現(xiàn)了以科研促教學(xué)的目的。我們的教學(xué)、科研成果也得到了國內(nèi)同行的認(rèn)可,2012年參加了第5版規(guī)劃教材的編寫?!堆簩W(xué)圖譜》和《骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)MCAI課件》是教具、教材建設(shè)的產(chǎn)物,在教學(xué)過程中發(fā)揮了重要作用。其中《血液學(xué)圖譜》一套2冊,學(xué)生每人1套,攜帶方便,解決了形態(tài)學(xué)學(xué)習(xí)的難題。
三、討論